結(jié)締組織生長因子對足細(xì)胞表達(dá)整合素連接激酶、nephrin及desmin的影響.pdf

1、目的:蛋白尿是慢性腎臟疾病最常見的臨床表現(xiàn)之一。足細(xì)胞損傷在蛋白尿發(fā)生和腎小球硬化的形成中起著重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)，上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial mesenchymal transition，EMT)不僅發(fā)生在腎小管上皮細(xì)胞中，腎小球臟層上皮細(xì)胞即足細(xì)胞也會(huì)發(fā)生EMT。整合素連接激酶(integrin linkedkinase，ILK)是一種重要的細(xì)胞內(nèi)信號分子，大量研究發(fā)現(xiàn)，ILK上調(diào)是足細(xì)胞損傷的共同反應(yīng)。本研究擬觀

2、察CTGF對體外培養(yǎng)的足細(xì)胞ILK、nephrin和desmin表達(dá)以及細(xì)胞表面形態(tài)改變的影響，以進(jìn)一步探討CTGF介導(dǎo)足細(xì)胞損傷的機(jī)制。
　　 方法:不同濃度rhCTGF(0、10、50ng/ml)干預(yù)足細(xì)胞24小時(shí)，觀察rhCTGF對ILK、nephrin及desmin表達(dá)影響的濃度效應(yīng)。以濃度為50ng/ml的rhCTGF干預(yù)足細(xì)胞0、24、48小時(shí)，觀察rhCTGF對ILK、nephrin及desmin表達(dá)影響的時(shí)間效應(yīng)

3、。分別用real time RT-PCR方法和Western blot方法檢測ILK、nephrin及desmin mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平。采用掃描電鏡技術(shù)(scanningelectron microscopy, SEM)觀察rhCTGF對足細(xì)胞表面形態(tài)改變的影響。
　　 結(jié)果:在基礎(chǔ)狀態(tài)下，足細(xì)胞表達(dá)其上皮標(biāo)志蛋白nephrin及少量間充質(zhì)標(biāo)志蛋白desmin，隨著rhCTGF濃度增加，與對照組相比，desmin表達(dá)

4、顯著增加(P＜0.05)，而nephrin表達(dá)顯著下降(P＜0.05);rhCTGF刺激24小時(shí)，足細(xì)胞desmin表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，而nephrin表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，隨著rhCTGF作用時(shí)間的延長，足細(xì)胞desmin表達(dá)進(jìn)一步增加(P＜0.05)，而nephrin表達(dá)進(jìn)一步減少(P＜0.05)。在基礎(chǔ)狀態(tài)下，足細(xì)胞表達(dá)一定量的ILK，rhCTGF能上調(diào)足細(xì)胞ILK表達(dá)。掃描電鏡顯示，對照組足細(xì)胞胞體表面相對光滑，微絨毛