LA促進PDTC抑制HeP-2細胞增殖作用及其機制初探.pdf

1、喉癌是目前一種常見的頭頸部惡性腫瘤，近年喉癌發(fā)病率逐年增加。PDTC(Pyrrolidinedithiocarbamicacid)是一種金屬螯合劑和抗氧化劑，被用于各種癌癥治療的研究。硫辛酸(Lipoicacid，LA)是一種天然抗氧化劑，其化學(xué)名稱為1，2-二硫戊環(huán)-3-戊酸，目前主要用于糖尿病、高血壓等慢性疾病的防治，近年研究發(fā)現(xiàn)硫辛酸有抗腫瘤作用。多種手段綜合治療是目前腫瘤治療的有效手段，本實驗以Hep-2細胞為材料，研究LA在與

2、PDTC聯(lián)合處理中對細胞增殖的影響。
　　為了探究硫辛酸(LA)是否能促進吡咯烷二硫代氨基甲鹽酸(PDTC)抑制腫瘤細胞增殖，體外培養(yǎng)人喉癌細胞系Hep-2細胞，加入LA、PDTC或LA+PDTC作用12，24和48h后，用WST-1法和軟瓊脂集落形成法檢測細胞增殖，Hoechst33258染色法和流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡和細胞周期。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LA5～500μM對Hep-2細胞增殖無抑制作用，PDTC5～50μM能明顯抑制Hep-2細

3、胞增殖，PDTC5μM聯(lián)合LA5，10，20和40μM對Hep-2細胞增殖的抑制率明顯高于對照組和PDTC單獨處理組。PDTC5μM與LA5μM聯(lián)合用藥時，在12～48h范圍內(nèi)對Hep-2細胞增殖的抑制率呈現(xiàn)時間依賴性，24h后軟瓊脂細胞集落形成數(shù)與PDTC單獨處理和LA單獨處理組相比明顯減少。Hoechst33258染色和流式細胞儀檢測結(jié)果表明，與PDTC和LA單獨處理組比較，PDTC5μM與LA5μM聯(lián)合用藥24h凋亡細胞增加，G2

4、/M期細胞百分率增加。實驗說明LA能夠促進PDTC抑制Hep-2細胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡。為進一步研究其調(diào)控機制，通過PCR檢測IFI16基因表達，設(shè)計IFI16基因shRNA序列，構(gòu)建IFI16基因干擾表達載體pGreenPuro-IFI16shRNA，轉(zhuǎn)染并建立pGreenPuro-IFI16shRNA/Hep-2和pGreenPuro-ControlshRNA/Hep-2細胞系，在細胞系基礎(chǔ)上通過WST-1檢測LA和PDTC聯(lián)合處理

5、對Hep-2細胞細胞增殖的影響，平板檢測集落形成能力，Hoechst33258染色檢測細胞凋亡，結(jié)果顯示LA和PDTC聯(lián)合處理Hep-2細胞24h后，IFI16基因表達升高;成功構(gòu)建IFI16基因干擾表達載體pGreenPuro-IFI16shRNA及穩(wěn)定表達該載體的Hep-2細胞系;IFI16基因干擾后，LA和PDTC聯(lián)合處理對Hep-2細胞增殖抑制率的影響明顯降低，抑制細胞集落形成能力和促進凋亡作用也有所減弱，說明IFI16基因在L