小檗胺對(duì)兔急性高眼壓視網(wǎng)膜損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討小檗胺(Berbamine,BER)對(duì)急性高眼壓下視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞(retinal neurons,RN)損傷的保護(hù)作用及其保護(hù)機(jī)制。
　　方法：將96只新西蘭大耳白兔隨機(jī)分成6組：正常對(duì)照組，陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，BER A、B、C組。正常對(duì)照組不做任何處理，陰性對(duì)照組造模前1h、術(shù)后1次/日用生理鹽水10mL灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組造模前1h、術(shù)后1次/日將維拉帕米（Verapamil，VER）用生理鹽水制備成10mL混懸液

2、灌胃，劑量為20mg/kg，BER A、B、C組造模前1h、術(shù)后1次/日將BER用生理鹽水制備成10mL混懸液灌胃，劑量依次為80mg/kg、100mg/kg、120mg/kg。除正常對(duì)照組以外，各組均行右眼前房穿刺灌注生理鹽水并用血壓計(jì)加壓的方法制作兔缺血-再灌注損傷動(dòng)物模型。術(shù)后即刻、24h、72h、168h四個(gè)時(shí)相處死大白兔，每個(gè)時(shí)相每組4只。按不同時(shí)段用Schiǒtz眼壓計(jì)定期測(cè)量眼壓，用火焰原子吸收分光光度法測(cè)量不同時(shí)段視網(wǎng)膜

3、組織Ca2+的變化，HE染色觀察視網(wǎng)膜厚度的變化，AgNOR染色檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs)的活性。
　　結(jié)果：
　　1．用前房穿刺灌注生理鹽水聯(lián)合血壓計(jì)加壓可使兔眼壓升高并維持在110mmHg左右。
　　2．兔視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量在視網(wǎng)膜缺血-再灌注損傷中再灌注即刻己經(jīng)有升高，各組與正常對(duì)照組比較，差異有顯著性（P<0.05），陰性組隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而繼續(xù)增高，到

4、術(shù)后168h仍維持較高水平。而B(niǎo)ER對(duì)細(xì)胞總鈣的影響隨劑量增加而增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量減少明顯，至術(shù)后168h，細(xì)胞總Ca2+含量逐漸降至正常，BERC組與正常對(duì)照組相比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)，另外VER組在各時(shí)相對(duì)Ca2+內(nèi)流有強(qiáng)烈的抑制作用，且高濃度的BER組作用效果跟VER組相比，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
　　3．陰性對(duì)照組組織學(xué)變化早期為視網(wǎng)膜水腫(尤以視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層及內(nèi)網(wǎng)狀層為明顯)。晚期視網(wǎng)膜內(nèi)層萎

5、縮、變薄，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目減少。陽(yáng)性對(duì)照組及BER A、B、C組視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)是：早期水腫較陰性對(duì)照組輕，晚期視網(wǎng)膜內(nèi)層的厚度明顯厚于陰性對(duì)照組，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)目明顯多于陰性對(duì)照組。在術(shù)后168h，BER C組、陽(yáng)性對(duì)照組視網(wǎng)膜大致恢復(fù)正常，神經(jīng)纖維層的厚度及RGCs數(shù)目與正常對(duì)照組相比，差異已不明顯（P>0.05）。
　　4．各試驗(yàn)組RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒在術(shù)后即刻無(wú)明顯變化，陰性對(duì)照組的RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀

6、染顆粒數(shù)在術(shù)后24h明顯減少，并隨時(shí)間延長(zhǎng)，RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)逐漸減少。陽(yáng)性對(duì)照組及BER A、B、C組RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)雖均小于正常對(duì)照組（P<0.05），但均高于陰性對(duì)照組（P<0.05），即差異有顯著性。在術(shù)后168h BER C組、陽(yáng)性對(duì)照組RGCs活性大致恢復(fù)正常，RGCs細(xì)胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)與正常對(duì)照組相比，差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．通過(guò)前房穿刺灌注生理鹽水并用血壓計(jì)加壓的

7、方法可獲得持續(xù)、穩(wěn)定且可控性的缺血-再灌注視網(wǎng)膜損傷動(dòng)物模型；
　　2．視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，可能參與了視網(wǎng)膜缺血-再灌注損傷后RGCs的凋亡；
　　3．視網(wǎng)膜損傷的主要組織學(xué)變化為視網(wǎng)膜內(nèi)層的變薄及RGCs數(shù)目的減少；
　　4．BER可以明顯減輕視網(wǎng)膜內(nèi)層的變薄及RGCs數(shù)目的減少；并對(duì)RGCs活性有部分保護(hù)作用；
　　5．BER可能通過(guò)抑制視網(wǎng)膜細(xì)胞Ca2+的內(nèi)流從而保護(hù)兔視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，并呈濃度依賴(lài)