缺失-重復突變檢測技術的評價和診斷策略及一個先天性眼球震顫家系的基因突變檢測.pdf

1、多重連接探針擴增(Multiplexligation-dependentprobeamplificationMLPA)技術是近年來發(fā)展的一項靈敏度較高的相對定量分析技術，利用簡單的雜交、連接及PCR擴增反應和電泳分離，于單一反應管內可同時檢測多個不同區(qū)域核昔酸序列的拷貝數變化。它己成功應用于Duchenne型肌營養(yǎng)不良癥(DuchennemusculardystrophyDMD)、亞端粒區(qū)域微缺失及其他基因缺失和重復導致的智力低下、各類

2、綜合征等疾病的檢測中。本課題引進MLPA技術用于DMD和威廉斯綜合征(WilliamsBeurensyndrome,WBS)的缺失/重復檢測，在此基礎上對其進行總結評價，從而創(chuàng)建了更為簡便的適于中國患者基因檢測的分子診斷策略，使其更易于基層單位的普遍推廣應用，獲得更大的臨床應用價值。一、Duchenne肌營養(yǎng)不良癥DMD是一種人類常見的致死性X連鎖隱性遺傳的神經肌肉系統疾病，發(fā)病率約為活產男嬰的1/3500，約ll3是散發(fā)病例。由于抗肌

3、萎縮蛋白基因突變影響dystrophin蛋白在橫紋肌組織的表達，導致肢體近端骨骼肌進行性萎縮、無力和膝腸肌假性肥大。致病基因DLi，位于Xp21.1-21.3，含79個外顯子。該病發(fā)生的分子基礎包括基因的部分缺失、部分重復及點突變等微小改變。本文首先對116例DMD患者的MLPA結果進行了分析評價，并在統計分析前期380例DMD患者的基因缺失突變譜的基礎上，建立了更適合于中國人DMD基因突變檢測的多重PCR新體系“5x2+6”，在普通單

4、位尤其是基層，它可作為DMD基因檢測的首選方案，而MLPA技術作為補充。兩者的聯合應用旨在建立更加簡便、快速、高效的DMD分子診斷策略。此外，本文亦對中國地區(qū)DMD患者的基因缺失/重復突變特點進行了詳細而深入的總結探討。二、威廉斯綜合征威廉斯綜合征是一種少見的遺傳性精神發(fā)育遲滯性疾病，在活產嬰兒中發(fā)病率約為1/10,000-1/20,000。它是由于染色體7q11.23微缺失而導致的一種鄰接基因缺失綜合征，最常見的缺失片段大小為1.SS

5、Mb。該病多為散發(fā)，部分為常染色體顯性遺傳。在基因檢測方面，本課題自行設計并建立了MLPA技術平臺，成功對五例臨床疑似WBS患者進行了基因分析，并最終確診。其中一例為父源缺失，其余四例均為母源缺失。在結果的驗證過程中發(fā)現，WBS缺失關鍵區(qū)域的短串聯重復序列(shorttandemrepeatSTR)在家系分析時總能提供豐富的多態(tài)性信息。因此，本課題首次對這些STR位點在小樣本中進行了多態(tài)性的初步分析，為優(yōu)選DNA標記位點進行WBS的缺失