Panne xin1對慢性社會挫敗應激誘導的小鼠抑郁樣行為的作用及機制.pdf

1、目的：重度抑郁癥（majo r depre ss io n d isord er，MDD）日漸成為對全球影響較為廣泛的精神類疾病，嚴重影響個體的健康以及生活質量。Panne xin1（Panx1）是近年來在脊椎動物中發(fā)現(xiàn)的一種新型縫隙連接通道（gap junction channels，GJCs），隨著GJCs在大腦神經(jīng)環(huán)路中的作用愈加明顯，本文建立小鼠的慢性社會挫敗應激（chronic social defeat stress，CSD

2、S）模型，以檢測與抑郁行為相關腦區(qū)中Panx1的蛋白以及基因表達的變化，并對其相互作用的復合物離子型嘌呤受體7（purinergic inotropic receptor7，P2RX7）的表達進行檢測，以確定其在抑郁行為中的作用機制。
　　方法：采用CSDS暴露構建小鼠抑郁模型；利用糖水偏好檢測（sucrose preference test，SPT），社會接觸檢測（social interaction test，SIT）等行為學

3、檢測其抑郁樣行為；實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，Q-PCR）定量分析目的基因的表達差異；蛋白免疫印跡（western blotting）檢測目的蛋白表達水平的改變；免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）檢測蛋白復合物之間的結合能力。
　　結果：
　?。?）經(jīng)慢性社會挫敗應激暴露的小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為，其糖水偏好率與正常組相比顯著下降，社會接觸時間明顯縮

4、短；
　　（2）與正常對照組相比，CSDS小鼠的抑郁相關腦區(qū)中間前額皮層（medium prefrontal cortex，mPFC）、海馬、杏仁核中，其基因水平均未發(fā)生顯著差異；
　　（3）與正常對照組相比，抑郁敏感小鼠mPFC中的Panx1蛋白表達水平下降；
　?。?）在CSDS模型中，杏仁核和海馬腦區(qū)中的Panx1蛋白與正常對照組相比無明顯改變；
　?。?）與對照組相比，CSDS組mPFC區(qū)P2RX7的蛋白

5、表達量顯著降低；
　?。?）與對照組相比，CSDS組杏仁核中P2RX7的蛋白表達量也顯著降低；但海馬中P2RX7的蛋白表達量無明顯變化；
　　（7）免疫共沉淀結果顯示，慢性社會挫敗應激模型小鼠Panx1與其復合體P2 RX7的結合能力顯著減弱。
　　結論：經(jīng)慢性社會挫敗應激的小鼠表現(xiàn)出明顯的抑郁樣行為。與行為學相對應，抑郁敏感小鼠的mPFC中，Panx1的蛋白水平表現(xiàn)出顯著的降低趨勢，與其相互作用的復合體P2RX7的表

6、達水平也顯著下調。另外，Panx1與P2RX7的結合能力減弱可能參與其抑郁樣行為的發(fā)病機制。
　　第二部分Pannexin1在小鼠抑郁樣行為中的作用
　　目的：Pannexin（Panx）與connexin（Cx）是脊椎動物中重要的兩個GJCs家族，在神經(jīng)元和膠質細胞的交流中起到橋梁的作用，Cx目前在情感類神經(jīng)環(huán)路以及突觸可塑性中發(fā)揮重要作用，而具有相似解剖學結構的Panx是否也參與其中，其功能以及作用都還不清楚。本部分將著

7、重研究Panx1這一在神經(jīng)組織中表達最為廣泛的Panx家族成員蛋白，在抑郁樣行為中的功能作用。
　　方法：采用腦區(qū)立體定位技術進行腦區(qū)定位給藥；使用縫隙連接通道的通用抑制劑甘珀酸（carbenoxolone，CBX）以及Panx1通道的特異性阻斷劑10Panx，檢測SPT以及新型攝食抑制（noverty suppression food test，NSFT）行為學的改變。
　　結果：
　?。?）側腦室分別給予藥理學阻斷

8、劑100μM CBX和100μM10Panx，檢測隨后1h，3h以及14h內的糖水消耗率，與溶劑對照組相比，給藥組小鼠均表現(xiàn)出降低的趨勢；在3h后的新型攝食抑制實驗結果也顯示，與溶劑對照組相比，給藥組表現(xiàn)出顯著的攝食時間延長，由此將給藥后3 h的時間點確定為行為學檢測時間；
　?。?）設置側腦室給予10Panx的藥物濃度梯度（10μM，50μM，100μM，200μM），當給予100μM10Panx時，小鼠的糖水偏好率與溶劑組相比

9、明顯降低；同時其攝食時間與溶劑對照組相比也顯著延長，因此確定10Panx誘導抑郁樣行為的有效給藥濃度為100μM；
　?。?）mPFC區(qū)給予藥理學阻斷劑10Panx，同樣誘導出小鼠的抑郁樣行為，在10Panx濃度為50μM時，小鼠的糖水偏好率與溶劑組相比顯著降低；其攝食延遲時間與溶劑組相比顯著延長。
　　結論：Panx1具有維持正常小鼠神經(jīng)系統(tǒng)生理功能的作用，抑制Panx1通道使其功能缺失，能誘導出小鼠抑郁樣行為，從而模擬抑