氣腫疽梭菌抗原提純及分析.pdf

1、本試驗旨在了解氣腫疽梭菌的抗原特性，提取經過厭氧培養(yǎng)的氣腫疽梭菌菌體及其分泌的毒素，粗提體抗原為氣腫疽梭菌標準菌株（C54-1）經過超聲波裂解后制備而成，粗提分泌抗原由毒素經飽和硫酸銨處理制備而成，再分別通過Sephadex G-200凝膠柱分離純化后，應用垂直凝膠電泳（SDS-PAGE）及免疫印跡實驗（Western blotting）對氣腫疽梭菌粗提及純化的菌體抗原和分泌抗原進行反應原性分析。結果表明，氣腫疽梭菌的體抗原有八個明顯的

2、蛋白峰，電泳圖譜上分別出現(xiàn)了與之相對應的條帶，分子質量分別為93kD、72kD、56kD、46kD、38kD、26kD、15kD、11kD，其中第二（72kD）、五（38kD）、六（26kD）峰的抗原表現(xiàn)出明顯的特異性。分泌抗原有七個主要蛋白峰，應用垂直凝膠電泳（SDS-PAGE）后，呈現(xiàn)明顯的藍色條帶的是第二、第三、第五、第七蛋白峰，蛋白質分子質量分別為93kD、70kD、48kD和32kD，用免疫印跡技術分析氣腫疽菌體抗原及分泌蛋白

3、的抗原組分發(fā)現(xiàn)，小鼠感染氣腫疽梭菌的陽性血清能與抗原組分蛋白起反應，其中菌體抗原72kD、38kD、26kD蛋白帶顯色最深，分泌抗原93kD和48kD呈現(xiàn)出特異性條帶。
　　將純化的特異性菌體及分泌抗原加入佐劑，免疫小白鼠（25g/只），并增設對照組，利用瓊脂擴散實驗原理，對純化的氣腫疽梭菌特異性蛋白抗原做免疫原性分析。結果表明，特異性氣腫疽梭菌菌體抗原產生的抗體效價最高可以達到1:64，比粗提全菌抗原所產生的效價高；氣腫疽梭菌特