豬鏈球菌2型精氨酸脫亞氨酶基因的克隆表達及活性分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩83頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、根據GenBank登錄的精氨酸脫亞氨酶(arginine deiminase，AD)序列AF546864，設計并合成一對引物，對包括豬鏈球菌2型的36株鏈球菌ad進行PcR檢測，29株豬鏈球菌均能檢出此基因，7株馬鏈球菌獸疫亞種均未檢出。對HA9801株、ZY05719、T15的ad片斷進行測序，經BLAST比對和DNAStar軟件分析，發(fā)現3株菌的ad序列與已發(fā)表的豬鏈球菌2型19841/1株的ad序列同源性高達99％，與化膿鏈球菌的

2、sagp和plr基因同源性分別為89％和88％。ad在豬鏈球菌中廣泛存在，且同源性較高。 對豬鏈球菌2型強毒株HA9801的ad進行PCR擴增，并將此基因片斷定向克隆至嚴緊型表達質粒pBAD/Myc-Hisc中，利用大腸桿菌ToP10成功表達了約47kD的AD融合蛋白，并經鎳柱親和層析，獲得純化的重組酶?；钚苑治鲲@示，該酶具有巰基酶和金屬酶的特征，其最適反應溫度為37℃，最適pH值為6.5。Western blot分析顯示，該

3、酶能與SS2-HA9801全菌蛋白制備的兔抗血清發(fā)生特異性反應，表明其具有一定的免疫原性。檢測該酶有助于進一步分析豬鏈球菌可能的毒力因子。 同一菌株在不同生長時期、不同生理狀態(tài)或者環(huán)境壓力下，其蛋白質的表達水平會發(fā)生變化，這種變化可能與細菌的致病力有某些聯(lián)系。基于上述假設，改變豬鏈球菌2型強毒株HA9801的培養(yǎng)溫度(從37℃升高到42℃)，分別提取菌株在不同生長條件下的膜蛋白，進行二維電泳和免疫轉印，結果發(fā)現其部分蛋白的表達

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論