去甲基化劑對胰腺癌細胞BxPC-3中microRNAs表達的影響.pdf

1、目的:
　　采用LNATM microRNA芯片技術(shù)，探討去甲基化劑5-氮雜脫氧胞苷酸對胰腺癌BxPc-3細胞中microRNAs表達的影響，并獲得DNA甲基化修飾的microRNA表達譜。
　　方法:
　　將胰腺癌BxPc-3細胞的培養(yǎng)及分實驗組和對照組，實驗組給予5-氮雜脫氧胞苷酸，處理72 hr，對照組給予同體積的PBS。再把裂解好的組織有機抽提，過濾分離RNA，然后用電泳檢查芯片RNA的完整性并用紫外分光光度測

2、定RNA濃度和純度。設(shè)定miRNA微陳列探針及熒光標(biāo)記miRNA(cy3/cy5)，經(jīng)過雜交和洗脫后，進行microRNA芯片檢測，采集掃描圖像和處理數(shù)據(jù)。然后再用Trizol法提取總RNA，并用1％瓊脂糖電泳驗證其完整性。最后根據(jù)芯片結(jié)果，選擇3個表達異常的miRNA進行RT-PCR，進一步驗證miRNA的異常表達結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)果:
　　1、依芯片結(jié)果，以RATIO＞2倍為上調(diào)和RATIO＜0.5倍為下調(diào)的標(biāo)準(zhǔn)，獲

3、得miRNA差異表達譜。分析得出，共有63種miRNA上調(diào)和21種miRNA下調(diào)。其中上調(diào)明顯的有6種miRNA(miR-605、miR-720、miR-197-4、miR-34b、miR-148a和miR-205)，下調(diào)明顯的有3種miRNA(miR-569、miR-1207-5p和miR-1268)。
　　2、從表達明顯異常的9種miRNA中選擇3種（miR-34b、miR-148a和miR-205）進行RT-PCR驗證發(fā)現(xiàn)3