P53在滑膜炎癥中的作用.pdf

1、[目的]：通過觀察P53與NF-κB、p38、Toll樣受體及其下游促炎癥性細胞因子之間的關(guān)系，以探討P53在滑膜炎癥中的作用，進而揭示P53在類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制中的重要作用。
　　[材料與方法]：取人膝關(guān)節(jié)滑膜組織體外培養(yǎng)滑膜成纖維樣細胞(FLS)。(1)分別用不同濃度的IL-17共同孵育24小時，收集培養(yǎng)上清行ELISA檢測細胞因子IL-6水平;同時裂解細胞收獲蛋白，利用western blot方法檢測P53的表達;(2)用

2、電轉(zhuǎn)法將p53 siRNA轉(zhuǎn)入FLS細胞并設(shè)立對照，72h后收集細胞提取總蛋白檢測P53表達;轉(zhuǎn)染p53-siRNA后，IL-17（0ng/ml和10ng/ml）刺激FLS24h，收集上清檢測IL-6水平，同時收集細胞提取RNA后real-time PCR檢測TLR2、TLR3、TLR4、TLR5 mRNA水平;電轉(zhuǎn)p53-siRNA和sc-siRNA后48h， IL-1740ng/ml刺激，分別于刺激0和20min收集細胞，提取總蛋白

3、檢測p-p65、p-p38。(3)不同濃度Ad-p53和Ad-lacZ（MOI為50、100、200、500和1000）分別轉(zhuǎn)染FLS24h，收集細胞提取總蛋白檢測P53。Ad-p53(MOI=100)和Ad-lacZ(MOI=100)轉(zhuǎn)染FLS24h，對照組為無腺病毒相同處理組，TL-17(10ng/ml)刺激24h，收集上清檢測IL-6水平。
　　[結(jié)果]：(1)IL-17可以抑制FLS中P53的表達，并促進FLS分泌IL-6

4、(P＜0.05);(2)p53 siRNA可以有效抑制FLS中P53的表達。在IL-17刺激時，P53表達顯著下降的FLS分泌IL-6較對照組顯著增加(P＜0.05);(3) P53表達顯著下降的FLS中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5的表達下降(P＜0.05);(4)在IL-17刺激下，p53 siRNA抑制P53引起P-P65和P-P38表達增高;(5)Ad-p53以MOI=100轉(zhuǎn)染FLS后，P53的表達顯著增加，IL-17