積雪草甙對人成纖維細胞增殖及膠原合成影響的實驗研究.pdf

1、目的：研究羥基積雪草甙(Md)對人皮膚成纖維細胞(HSFb)的增殖及膠原蛋白合成的影響。 方法：積雪草甙對皮膚損傷修復具有明顯的生物學作用，但Md的生物活性及其在修復中的作用機理卻鮮有報道。本實驗以體外培養(yǎng)的HSFb為研究對象，對Md的生物活性進行研究，為進一步的臨床應用提供理論基礎。取手術后剩余的正常皮膚，采用膠原酶消化培養(yǎng)法培養(yǎng)HSFb。原代培養(yǎng)細胞達到90％融合狀態(tài)下，按細胞數的1：3比例進行傳代培養(yǎng)，至第6代時進行實驗。

2、實驗共分2組，對照組：DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)HSFb；實驗組：應用終質量濃度分別為10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml和150ug/ml的含Md的DMEM培養(yǎng)基溶液(2 ml/孔)計數培養(yǎng)48h。MTT法研究Md對HSFb增殖的影響；收集培養(yǎng)細胞上清液，通過放射免疫的方法測定實驗組和空白對照組細胞上清中Ⅰ型前膠原氨基端肽原(PI NP)和Ⅲ型前膠原氨基端肽原(PⅢNP)含量。 結果：細胞接種后1 d細胞數均

3、較低，2 d后兩組HSFb明顯增加，表明該細胞已進人對數生長期，而對照組HSFb進入對數生長期相對較慢，生長曲線上顯示，未加入Md的HSFb生長要比實驗組HSFb慢。Md在10ug/ml～150 ug/ml劑量內對HSFb的生長有明顯的促進細胞增殖作用。培養(yǎng)48h后實驗組及對照組均表達PI NP、PⅢNP，Md實驗組中PI NP、PⅢNP含量隨藥物劑量增加而升高，與對照組相比，實驗組PINP、PⅢNP蛋白合成方面，除10 ug/ml濃度