馬尾松花粉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其活性研究.pdf

1、本文以馬尾松花粉為原料，對(duì)其中的花粉活性多糖的提取工藝進(jìn)行研究，采用DEAE-SephadexA-25柱層析、SephadexG-75凝膠柱層析對(duì)花粉粗多糖進(jìn)行了分離和純化；運(yùn)用紅外光譜分析、紫外掃描分析、氣相色譜、氣相-質(zhì)譜聯(lián)用分析等方法對(duì)花粉多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究；通過(guò)體外模擬實(shí)驗(yàn)和MTT法研究松花粉多糖對(duì)活性氧自由基的清除效果及對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株Sp2/0、HepG2、Hela生長(zhǎng)的影響。主要研究結(jié)果如下： 1.馬尾松花粉

2、多糖提取工藝的研究。 研究了馬尾松花粉破壁方法、溫度、料液比、提取時(shí)間、浸提次數(shù)等因素對(duì)松花粉多糖提取效果的影響，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取工藝參數(shù)。結(jié)果表明：超微粉碎破壁方法最好；提取時(shí)間為2h，提取溫度為85℃，料水比為1:15，浸提次數(shù)為4次，為最佳提取工藝參數(shù)，花粉多糖得率為1.70％。 2.馬尾松花粉多糖的分離及純化研究。 采用DEAE-SephadexA-25層析法對(duì)花粉粗多糖進(jìn)行了初步分離，采用Se

3、phadexG-75凝膠柱層析對(duì)花粉多糖進(jìn)一步分級(jí)。結(jié)果表明：花粉粗多糖以95％乙醇沉淀后上DEAE-SephadexA-25層析柱，得到四個(gè)級(jí)分，分別為MTP1、MTP2、MTP3、MTP4，透析后，濃縮凍干處理得淡黃色粉末，得率分別為27.18％、7.03％、9.22％、19.60％；取MTP1，MTP4經(jīng)SephadexG-75凝膠柱分級(jí)，分別得精制花粉多糖MTP1-A、MTP4-A，得率分別為33.0％和26.0％。 3

4、.MTP1-A、MTP4-A的結(jié)構(gòu)初步分析。 采用紅外光譜分析、紫外掃描分析、氣相色譜、氣相-質(zhì)譜聯(lián)用分析等方法對(duì)花粉多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明：MTP1-A由甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖組成，各單糖組成摩爾比為1:0.43:0.33；MTP4-A由葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖組成，各單糖摩爾比為1:0.30:0.14:0.11。氣-質(zhì)分析表明MTP1-A、MTP4-A均存在呋喃和吡喃環(huán)，紫外掃描分析顯示不含糖蛋白，I2

5、-KI反應(yīng)表明含有較長(zhǎng)的側(cè)鏈和較多的分支，β-消去反應(yīng)表明存在O-糖苷鍵。 4.馬尾松花粉多糖體外抗氧化及抗腫瘤活性研究。 通過(guò)體外模擬實(shí)驗(yàn)，研究不同種類的松花粉多糖對(duì)活性氧自由基的清除效果，采用MTT法檢測(cè)了花粉多糖對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株Sp2/0，HepG2，Hela生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，不同種類的花粉多糖對(duì)超氧陰離子和羥基自由基有一定的量效關(guān)系，但是這種量效效應(yīng)表現(xiàn)的不明顯；對(duì)DPPH自由基的清除實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)出較好的活性，且