豬繁殖與呼吸綜合征病毒M蛋白基因重組犬2型腺病毒活載體疫苗的構(gòu)建及其免疫原性研究.pdf

1、利用RT-PC擴(kuò)增了PRRSV吉林分離株(JL)M蛋白基因，并對(duì)擴(kuò)增序列進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示JL株M蛋白基因全長(zhǎng)525bp、編碼175個(gè)氨基酸；與GenBank中己報(bào)道的PRRSV美洲型部分毒株相比，M蛋白基因核苷酸的同源性為91.4％-99.8％，推導(dǎo)的氨基酸序列同源性為92.1％-99.7％：遺傳進(jìn)化分析表明，JL株M蛋白基因與BJ-4毒珠、VR-2332等毒株聚為一枝，屬于PRRSV美洲基因型；用DNAstar軟件對(duì)兒株M蛋白抗原

2、表位進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其與BJ-4珠和VR-2332株差異不明顯，說(shuō)明兒株與部分強(qiáng)毒株M蛋白有相似的抗原特性。 以感染性犬2型腺病毒全基因組為載體，構(gòu)建了含有M蛋白基因的重組質(zhì)粒pPoly-II-CAV-2．M。脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組基因組轉(zhuǎn)染MDCK細(xì)胞，獲得重組病毒，經(jīng)多酶切和PCR鑒定，表明獲得了含M蛋白基因的重組病毒CAV-2-M；對(duì)重組病毒CAV-2-M的遺傳穩(wěn)定性和M蛋白基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，重組病毒在體外連續(xù)

3、傳代，性質(zhì)穩(wěn)定，沒(méi)有出現(xiàn)外源基因的缺失和重排；重組病毒感染細(xì)胞后能夠穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄和表達(dá)PRRSV M蛋白基因，具有良好的反應(yīng)原性。 將重組病毒CAV-2-M采用肌肉注射接種20日齡仔豬，定期對(duì)受試動(dòng)物血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，重組病毒CAV-2-M能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)M蛋白的特異性抗體，并可檢測(cè)到較微弱的中和PRRSV活性：同時(shí)對(duì)受試動(dòng)物外周血進(jìn)行了淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測(cè)，結(jié)果表明M蛋白可以特異地刺激受試動(dòng)物淋巴細(xì)胞增殖。 本研