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文檔簡介
1、本文利用基因工程手段通過農桿菌介導法將抗旱、耐鹽基因PSCS轉化到向日葵中，并成功獲得了PCR-Southern雜交檢測為陽性的轉基因植株，為向日葵的抗旱、耐鹽育種研究提供新的試驗依據(jù)。主要研究內容與結果如下： 1、通過PCR對載體pBIP5CS-F129A進行特異性擴增，獲得了目的基因PSCS(1905bp)并對其進行克隆。利用限制性核酸內切酶BamH Ⅰ和Sal Ⅰ將目的基因從克隆重組質粒消化下來，定向插入到植物表達載體pC
2、HF3的CaMV35S啟動子下游和NOS終止子上游，成功地構建了PSCS基因植物表達載體pCHF3/PSCS,通過凍融法將此表達載體導入農桿菌LBA4404中，提取轉化質粒，經PCR鑒定表明P5CS基因植物表達雙元載體構建成功。 2、以向日葵保持系75-33B和恢復系Ht80-97為轉化受體材料，用攜帶PSCS基因的雙元載體系統(tǒng)的根癌農桿菌進行葉盤轉化，獲得抗Kan的轉基因植株。對轉化植株總DNA進行PCR檢測，以表達載體重組質
3、粒pCHF3/P5CS的PCR產物為陽性對照，以非轉基因向日葵基因組pCR產物為陰性對照，對轉基因向日葵基因組進行PCR-Southern雜交檢測，證實獲得陽性轉基因植株75-33B為2株，Ht80-97為4株，轉化率分別是3.17％和4.65％。 3、試驗中對抗性芽篩選的Kan濃度設定為25mg/L，農桿菌的侵染濃度OD<,600nm>值為0.8，通過設定三個不同侵染時間(10min、20min和30min)的處理，結果經分析
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