常見病原菌快速基因診斷系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、PCR技術(shù)的應(yīng)用為臨床診斷提供了快速和敏感的檢測方法.基因芯片技術(shù)是新一代的基因診斷技術(shù),其主要特點(diǎn)是快速、高效、敏感、經(jīng)濟(jì),現(xiàn)已成為當(dāng)今多學(xué)科交叉、綜合的前沿研究熱點(diǎn).該課題利用細(xì)菌16S rRNA基因的一系列特點(diǎn),設(shè)計合成PCR反應(yīng)引物及部分細(xì)菌特異性探針,構(gòu)建基因芯片,并利用芯片對細(xì)菌進(jìn)行快速診斷作系統(tǒng)探討研究.第一部分 細(xì)菌16S rRNA基因的擴(kuò)增及應(yīng)用 目的:利用細(xì)菌16S rRNA基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),設(shè)計細(xì)菌16S rRNA基

2、因擴(kuò)增的引物,并判定引物的特異性與敏感性,利用其對細(xì)菌進(jìn)行檢測鑒定.方法:在細(xì)菌16S rRNA基因保守區(qū)設(shè)計所有細(xì)菌PCR反應(yīng)的通用引物,通過對PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化等措施,建立合適的PCR反應(yīng)條件,通過對多種細(xì)菌DNA、2種病毒DNA及人血白細(xì)胞DNA進(jìn)行擴(kuò)增,利用瓊脂糖凝膠電泳等檢測方法確定引物的特異性及敏感性.第二部分 快速診斷基因芯片的構(gòu)建 目的:利用細(xì)菌16S rRNA基因的特點(diǎn),設(shè)計革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、肺炎鏈球菌、金黃色

3、葡萄球菌及大腸埃希菌的特異性探針,構(gòu)建成基因芯片,用于對細(xì)菌檢測.方法:在細(xì)菌16S rRNA基因保守分別設(shè)計合成革蘭陽性菌、革蘭陰性菌的通用探針,在其可變區(qū)設(shè)計合成肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌的特異性探針,制備成基因芯片,通過對雜交條件的優(yōu)化以獲得最佳檢測結(jié)果.用不同細(xì)菌的擴(kuò)增產(chǎn)物檢測所制備的芯片特異性及敏感性.第三部分 基因芯片的臨床應(yīng)用 目的:利用所制備的基因芯片,通過對臨床標(biāo)本的檢測,探索其臨床應(yīng)用前景.方法:無菌采集