他莫昔芬對膠質(zhì)瘤SHG44細胞輻射敏感性的影響及其作用機制研究.pdf

1、目的:本課題主要通過研究他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線輻照對SHG44.細胞DNA損傷及修復(fù)的影響；他莫昔芬聯(lián)合輻照對SHG44細胞Caspase9活性的影響；他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線輻照對SHG44細胞PK Cα、Cyclin D1及Bcl-2表達的影響；他莫昔芬聯(lián)合60 Coγ線輻照對SHG44細胞PI3K／Akt信號通路的影響；探討他莫昔芬對腦膠質(zhì)瘤細胞輻射敏感性的影響及其作用機制。
　　 方法:采用堿性單細胞凝膠電泳法檢測

2、及評價膠質(zhì)瘤SHG44細胞DNA損傷及修復(fù)的程度；分光光度計法檢測()HG44細胞Caspase9活性的變化；Western blot法分析PKCα、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表達變化；Western blot法分析P13K／Akt信號通路相關(guān)蛋白Akt、p-Akt、p-c-Raf、p-PTEN、p-PDK1、p-GSK-3β蛋白表達變化。
　　 結(jié)果:1、堿性單細胞凝膠電泳法檢測顯示:他莫昔芬加重了輻射導(dǎo)致的膠質(zhì)瘤細胞

3、SHG44的DNA鏈初始損傷,處理后即刻照射聯(lián)合藥物組較單獨輻照組OTM值增加89.5％(p<0.05)；隨著時間的延長,各實驗組OTM值逐漸變小,處理后2h除輻照聯(lián)合藥物組仍有明顯損傷殘留外其余組均接近完全修復(fù)。2、分光光度計法數(shù)據(jù)顯示處理后各實驗組與對照組相比Caspase9活性均增高,48h時各實驗組的Caspase9活性與相對應(yīng)的24h結(jié)果相比均明顯升高(p<0.05)；相同時間點藥物聯(lián)合輻照組與對照組、單獨藥物組和單獨輻照組相

4、比,Caspase9活性明顯升高(p<0.05)；10μ mol／L+4Gy組Caspase9活性明顯高于10μmol／L+2Gy組,24h和48h時Caspase9活性分別增加21.9％和73.4％(p<0.05)。3、Western blot檢測提示他莫昔芬增強輻照下調(diào)PKCα蛋白表達的作用,與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白表達分別降低38.3％和43.1％,48 h降低53.0％和27.7％；輻照誘導(dǎo)Cyclin D1蛋白表

5、達量增加,聯(lián)合作用后蛋白表達明顯下調(diào),與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白蛋白表達分別降低61.7％和72.6％,48 h降低49.3％和51.5％；他莫昔芬增強輻照下調(diào)Bcl-2蛋白表達的作用,與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白表達分別降低34.7％和27.5％,48 h降低51.4％和45.5％。4、Western blot檢測結(jié)果顯示,輻照聯(lián)合藥物組Akt、p-c-Raf、p-PDK1蛋白表達與其他組無明顯差別。輻照誘導(dǎo)p-

6、Akt蛋白表達量增加,聯(lián)合作用后蛋白表達明顯下調(diào),與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白表達分別降低21.4％和31.6％,48 h降低33.9％和53.7％；他莫昔芬增強輻照上調(diào)p-PTEN蛋白表達的作用,與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白表達分別增高31.4％和20.6％,48 h增高10.9％和25.6％；他莫昔芬與輻照聯(lián)用后p-GSK-3β蛋白表達明顯下調(diào),與單獨輻照組相比聯(lián)用后在24 h時蛋白表達分別降低28.1％和47.

7、2％,48 h降低42.4％和53.4％。
　　 結(jié)論:(1)10μM他莫昔芬增強輻照所致的DNA鏈初始損傷,延緩DNA損傷修復(fù)的過程。
　　 (2)10μ M他莫昔芬提高輻照誘導(dǎo)的細胞內(nèi)Caspase9活性水平,增加輻射誘導(dǎo)的線粒體途徑的凋亡反應(yīng)
　　 (3)10μ M他莫昔芬聯(lián)合輻射下調(diào)PKCα、Cyclin D1、Bcl-2、p-Akt及p-GSK-3β的蛋白表達,上調(diào)p-PTEN蛋白的表達,對p-c-Ra