吡那地爾預處理對內毒素血癥保護效應及其機理的實驗研究.pdf

1、該實驗首次用可模擬缺血預適應的Pinacidil預處理動物及細胞,觀察對內毒素血癥的預保護作用及其作用機理.首先該課題在驗證Pinacidil對內毒素血癥有無預保護作用的基礎上,以K<,ATP>通道關閉劑Glyburide為工具藥,針對內毒素血癥致死的主要機制,觀察Pinacidil預處理對內毒素血癥時血液凝血機制的影響,對內毒素血癥細胞因子產生及其信號轉導調控機制的作用,以及在Pinacidil預處理后對中性粒細胞呼吸爆發(fā)的影響,主要

2、的結果及結論如下:1.Pinacidil預處理后內毒素血癥小鼠生存率明顯增加,Glyburide可以拮抗Pinacidil的作用,使生存率與未治療組相差不明顯.2.用沉淀法對大鼠血液凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ及纖維蛋白原含量研究發(fā)現,Pinacidil預處理可使內毒素血癥時凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ減少滯后,在各時相點均使纖維蛋白原量明顯高于LPS組,Glyburide對Pinacidil有明顯的拮抗作用. 3.用ELISA法檢測大鼠血液細胞因

3、子TNF-α、IL-6含量顯示,Pinacidil預處理使內毒素血癥TNF-α、IL-6含量明顯降低;在用LPS攻擊人單核細胞株THP-1時也發(fā)現,Pinacidil預處理可使THP-1生成TNF-α、IL-6明顯減少,Glyburide對Pinacidil預處理有明顯的拮抗作用,表明Pinacidil預處理使SIRS反應中單核/巨噬細胞生成細胞因子TNF-α、IL-6減少,繼而降低血液中TNF-α、IL-6含量,減輕SIRS反應. 4

4、.該文用流式細胞儀研究THP-1細胞膜表面抗體標記的TLR4時發(fā)現,在LPS的攻擊下,LPS跨膜受體TLR4的表達呈可誘導性表達;我們首次發(fā)現在不同濃度的LPS刺激下,Pinacidil預處理使THP-1細胞膜表面TLR4表達量明顯降低;在用ELISA法研究核內NF-κB(p65)表達量時也顯示,Pinacidil預處理使不同濃度LPS刺激后NF-κB(p65)表達量降低,Glyturide對以上反應均有拮抗作用.5.在研究中性粒細胞呼

5、吸爆發(fā)和細胞內[Ca<'2+>]變化時結果顯示,Pinacidil預處理使LPS攻擊后胞內游離[Ca<'2+>]升高程度明顯降低,并使中性粒細胞在PMA刺激下呼吸爆發(fā)明顯減弱,Glyburide明顯拮抗Pinacidil預處理的作用.因此Pinacidil預處理可抑制中性粒細胞呼吸爆發(fā)作用,減少氧自由基生成,減輕對器官和細胞的損傷. 綜上所述,Pinacidil預處理對內毒素血癥具有藥理性預適應效應,其作用機理為減輕LPS導致的凝血功能