家蠶皮膚胰蛋白酶抑制劑和血管緊張素轉化酶抑制劑的初步分離純化及性質研究.pdf

1、家蠶(Bombyx moti)，也叫桑蠶，屬于無脊椎動物，昆蟲綱，鱗翅目，家蠶蛾科。當家蠶遇到外界的物理、化學和生物等因素的刺激后，其血淋巴中很快出現(xiàn)一系列免疫物質如抗菌蛋白、抗菌菌多肽、溶菌酶及凝集素等抗菌物質以對抗外源微生物的人侵，而這些抗菌物質可望成為一類新的高效低毒的抗菌、抗病毒和抗癌新藥，為了研究家蠶皮膚中是否存在這種抗菌物質或者具有其它藥用價值的組分，本論文主要檢測了家蠶皮膚中的胰蛋白酶抑制劑和血管緊張素轉化酶抑制劑并對其進

2、行了初步的分離純化和陛質研究，主要內容如下： 1.家蠶皮膚胰蛋白酶抑制劑的初步分離純化及性質研究 以家蠶為實驗材料，從家蠶皮膚中部分純化出一種胰蛋白酶抑制劑，并對其性質進行了初步的研究。 抽提家蠶皮膚和體液組織總蛋白，通過檢測不同的胰蛋白酶、明膠濃度以及酶解時間對電泳的影響，確立了進行活性電泳的最適條件為：活性電泳時分離膠中含有0.075％的明膠，電泳結束后用0.1mg/ml胰蛋白酶酶解1h。 家蠶皮膚總

3、蛋白樣品抽提液經70％硫酸銨沉淀鹽析，透析脫鹽后得到粗酶液。利用明膠-PAGE活性電泳研究家蠶皮膚粗酶液中胰蛋白酶抑制劑的種類以及各抑制劑的熱穩(wěn)定性。粗酶液中共檢測到8種胰蛋白酶抑制劑，大多數(shù)抑制劑均具有一定的熱穩(wěn)定性，40℃處理后活性幾乎不受影響，50℃處理后活性減弱，60℃以上多數(shù)抑制劑活性完全喪失，但有兩種抑制劑具有較高的熱穩(wěn)定性，經過100℃煮沸后其活性幾乎不受影響。 進一步利用DEAE-52纖維素離子交換層析對粗酶液進

4、行純化，用含不同鹽濃度的緩沖液分步洗脫，分別收集各洗脫峰，透析脫鹽，PEG20000濃縮后用明膠-PAGE活性電泳檢測純化結果。粗酶液中的胰蛋白酶抑制劑主要集中在0.1 M NaCl和0.2 MNaCl洗脫峰中，其中0.1 M NaCl洗脫峰主要含有一些熱穩(wěn)定性相對較高的抑制劑種類。 2.家蠶皮膚血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑的檢測和初步分離純化 用兩種不同底物分別測定血管緊張素轉化酶的活性，評價了血管緊張素轉化酶抑制