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文檔簡介
1、研究背景特發(fā)性脊柱側(cè)凸(IdiopathicScoliosis,以下簡稱IS)是兒童和青少年最常見的脊椎畸形,其病因仍然不清楚。雖然近年來的研究發(fā)現(xiàn)了許多可能的致病因素,如基因遺傳因素、生長發(fā)育因素、激素的影響、結(jié)締組織病變、肌肉系統(tǒng)的異常、神經(jīng)系統(tǒng)因素、褪黑素的作用以及血小板的因素等等,但至今國內(nèi)外對IS的病因認識仍處于朦朧階段。所以目前還難從病因角度上去預防和治療。 動物模型是病因?qū)W研究的重要方法。自從Thillard等[1
2、]報道松果體切除可以在小雞中誘發(fā)出脊柱側(cè)凸的動物模型后,學者們對松果體以及其分泌的激素—褪黑素在IS中的作用進行了廣泛的研究,試圖通過褪黑素揭示IS的病因。近年來,Machida等又報道了松果體切除可以在雙足鼠中誘發(fā)出脊柱側(cè)凸[2-6],但此模型側(cè)凸發(fā)生機理以及在IS病因研究中的作用還需要進一步研究。 另外,IS是一種與生長相關(guān)的疾病,只要患者存在生長潛能,側(cè)凸就有進一步加重的危險。而與脊柱生長最直接的相關(guān)因素就是椎體的生長板軟
3、骨。對于椎體生長板軟骨在側(cè)凸發(fā)生、發(fā)展中作用的研究目前還比較少,而且也面臨著在IS病人中取材的困難。本研究試圖通過對側(cè)凸動物模型椎體生長板軟骨的研究探討人類IS的病因,并提出IS病因?qū)W假說。 研究目的驗證松果體切除是否能在雙足鼠中誘發(fā)出脊柱側(cè)凸動物模型并對此模型側(cè)凸發(fā)生原因進行探討。研究該模型椎體生長板軟骨細胞的凋亡以及Fas表達在側(cè)凸發(fā)生、發(fā)展中的作用。 研究方法剛斷乳的SD大鼠30只,隨機分為3組。對照組10只,不作
4、任何處理。雙足鼠組10只,截除雙上肢,制造雙足鼠模型。松果體切除的雙足鼠組10只,行雙上肢截肢并行松果體切除。3個月后觀察這3組SD大鼠脊柱的改變。然后通過TUNEL法檢測SD大鼠椎體生長板軟骨細胞的凋亡。通過免疫組化和原位雜交檢測生長板軟骨細胞的Fas表達。 研究結(jié)果對照組和雙足鼠組中沒有脊柱側(cè)凸的發(fā)生,而松果體切除的10只雙足鼠皆發(fā)生了脊柱側(cè)凸,Cobb角17°~32°,平均23.5°。在對側(cè)凸頂椎的研究中發(fā)現(xiàn),發(fā)生側(cè)凸的S
5、D大鼠椎間盤存在楔形變。在SD大鼠腦組織的檢查中發(fā)現(xiàn),與對照組和雙足鼠組相比,松果體切除組術(shù)后腦組織存在明顯的損傷。與對照組相比,雙足鼠和松果體切除后雙足鼠的生長板軟骨的增殖狀態(tài)受到抑制。松果體切除后發(fā)生脊柱側(cè)凸的SD大鼠凹側(cè)生長板軟骨細胞的凋亡指數(shù)較凸側(cè)、雙足鼠組以及對照組明顯增加。免疫組化和原位雜交發(fā)現(xiàn),凋亡因子Fas在松果體切除脊柱側(cè)凸SD大鼠凹側(cè)生長板軟骨細胞內(nèi)表達增強。 結(jié)論1.松果體切除可以在雙足鼠中誘發(fā)出脊柱側(cè)凸的
6、動物模型,松果體切除和雙足狀態(tài)是該模型側(cè)凸發(fā)生的必要條件。 2.雙足狀態(tài)使SD大鼠椎體的生長板軟骨增殖受到抑制。 3.該側(cè)凸模型頂椎椎體凹側(cè)生長板軟骨存在明顯的細胞凋亡。 4.Fas在該側(cè)凸模型頂椎椎體凹側(cè)生長板內(nèi)表達增加,提示凹側(cè)生長板的細胞凋亡可能是由Fas所調(diào)節(jié)。 5.側(cè)凸發(fā)生后的生物力學因素是該模型生長板軟骨細胞凋亡的原因,同時生長板軟骨細胞的凋亡將加重側(cè)凸的發(fā)展,從而形成側(cè)凸發(fā)展和加重的惡性循環(huán)
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