藻藍蛋白對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的：探討藻藍蛋白對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組、模型對照組、藻藍蛋白組進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量腦梗死體積，用干濕重法計算腦的含水量，應(yīng)用原位末端標記(TUNEL)觀察腦缺血再灌注不同時間點神經(jīng)元凋亡的變化。結(jié)果：(1)在大鼠腦缺血再灌注后2h應(yīng)用藻藍蛋白，能夠明顯改善神經(jīng)功能缺失癥狀，腦缺血再灌注后24h，藻藍蛋白組的Bederson神經(jīng)

2、功能評分明顯低于模型對照組，且這種差異一直持續(xù)到腦缺血再灌注后48h。藻藍蛋白還能夠減少腦的梗死體積，腦缺血再灌注后48h，藻藍蛋白組的腦梗死體積明顯低于模型對照組。藻藍蛋白還能夠減輕腦水腫，使腦組織的含水量明顯減少。(2)模型對照組，腦缺血再灌注后凋亡神經(jīng)元主要分布于缺血周圍區(qū)，隨著再灌注時間的延長凋亡細胞數(shù)逐漸增加，至24h達高峰，2d開始下降，14d時仍高于假手術(shù)組。藻藍蛋白組凋亡細胞的數(shù)量相對較少，其變化規(guī)律與模型對照組相似，同

3、一時間點相比較，藻藍蛋白組均顯著低于模型對照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)神經(jīng)元的凋亡是一個動態(tài)的漸進過程。藻藍蛋白對腦缺血再灌注損傷有明顯的保護作用。 目的：探討藻藍蛋白對大鼠局灶性腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達的影響。方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組、模型對照組、藻藍蛋白組進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量各層面腦梗死面積的百分比，應(yīng)用

4、原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注不同時間點CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達。結(jié)果：(1)假手術(shù)組雙側(cè)半球和模型對照組非缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元CytCmRNA均有微弱表達。模型對照組缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元CytCmRNA表達增強，主要位于皮層區(qū)和紋狀體區(qū)。在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)，腦缺血再灌注后6h神經(jīng)細胞即出現(xiàn)CytCmRNA表達，隨著再灌注時間的延長逐漸增強，在皮層區(qū)于12h達高峰，而在紋狀體區(qū)于24h達高峰，達高峰后表達均逐漸減

5、弱，至14d仍高于假手術(shù)組。藻藍蛋白組在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)CytCmRNA表達的變化趨勢與模型對照組相似，但同一時間點相比，明顯低于模型對照組。(2)假手術(shù)組和模型對照組非缺血側(cè)腦組織可見到少量Caspase-3mRNA陽性細胞。模型對照組，缺血再灌注6h后Caspase-3mRNA陽性細胞數(shù)開始增加，至再灌注24h達高峰，2d后陽性細胞逐漸減少，至14d時仍有表達，略高于假手術(shù)組，各相鄰時間點比較差異顯著。藻藍蛋白組Caspase-3陽

6、性細胞的數(shù)量相對較少，其變化規(guī)律與模型對照組相似，同一時間點相比，藻藍蛋白組Caspase-3陽性細胞數(shù)均顯著低于模型對照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)的神經(jīng)元內(nèi)CytCmRNA和Caspase-3mRNA均高表達，二者在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。藻藍蛋白對腦缺血再灌注損傷有明顯的保護作用，藻藍蛋白可能通過減少CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達這一途徑來抵抗腦缺血再灌注損傷。 目的：探討藻藍蛋白對

7、大鼠局灶性腦缺血再灌注后MMP-2和MMP-9表達的影響。方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組、模型對照組、藻藍蛋白組進行腦含水量及EB含量的測定，用免疫組化技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時間點MMP-2和MMP-9的表達。結(jié)果：(1)腦缺血再灌注后6h就可出現(xiàn)腦含水量增加，至2d達高峰，隨后開始下降，14d時基本回到正常水平。應(yīng)用藻藍蛋白后腦含水量明顯減少。(2)腦缺血再灌注后6hEB含量就開

8、始增加，然后呈下降趨勢，降至24h以后又增高，至2d時達高峰，隨后再逐漸下降，至14d時，腦EB含量明顯減少，與假手術(shù)組相比無顯著性差異。應(yīng)用藻藍蛋白后腦組織EB的含量降低。(3)假手術(shù)組和模型對照組非缺血側(cè)腦組織只有少量MMP-2陽性細胞。模型對照組缺血側(cè)腦組織MMP-2陽性細胞主要位于缺血區(qū)與周邊區(qū)。再灌注后24h可見MMP-2陽性細胞開始出現(xiàn)，3d～7d時陽性細胞數(shù)達高峰，至14d時仍有表達，略高于假手術(shù)組。藻藍蛋白組的MMP-2

9、陽性細胞的分布區(qū)域與模型對照組相同，其動態(tài)變化趨勢與模型對照組相似，但同一時間點相比，明顯低于模型對照組。(4)假手術(shù)組和模型對照組非缺血側(cè)腦組織可見到少量MMP-9陽性細胞。模型對照組缺血側(cè)腦組織MMP-9陽性細胞也主要位于缺血區(qū)與周邊區(qū)。缺血再灌注后6h缺血區(qū)內(nèi)MMP-9陽性細胞開始出現(xiàn)，12h明顯增高，至2d達高峰，3d后陽性細胞數(shù)開始減少，至14d時恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，各相鄰時間點比較差異顯著。藻藍蛋白組的MMP-9陽性細胞的分布區(qū)

10、域與模型對照組相同，其動態(tài)變化趨勢與模型對照組相似，但同一時間點相比，明顯低于模型對照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，病變區(qū)MMP-2和MMP-9表達增加，二者在腦缺血再灌注后腦水腫方面起重要作用。藻藍蛋白可能通過影響MMP-2和MMP-9的表達這一途徑來減輕腦水腫，對腦缺血再灌注損傷具有保護作用。 目的：探討藻藍蛋白對大鼠局灶性腦缺血再灌注后COX-2及COX-2mRNA表達的影響。方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型

11、(MCAO)，分別對假手術(shù)組、模型對照組、藻藍蛋白組進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量腦梗塞體積，應(yīng)用免疫組化和原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時間點COX-2及COX-2mRNA在神經(jīng)元中的表達情況。結(jié)果：(1)假手術(shù)組和模型對照組非缺血側(cè)腦組織可見到少量COX-2陽性細胞。模型對照組COX-2陽性細胞主要位于缺血周圍區(qū)，而缺血中心區(qū)僅有少量陽性細胞出現(xiàn)，缺血再灌注后6hCOX-2陽性細胞數(shù)開始增加，至再灌注24h達高峰，

12、2d后陽性細胞逐漸減少，至14d時仍有表達，略高于假手術(shù)組。藻藍蛋白組COX-2陽性細胞也主要位于缺血周圍區(qū)，陽性細胞數(shù)量相對較少，其變化規(guī)律與模型對照組相似，同一時間點相比較，藻藍蛋白組周圍區(qū)COX-2陽性細胞數(shù)均顯著低于模型對照組。(2)假手術(shù)組和模型對照組非缺血側(cè)腦組織可見到少量COX-2mRNA的表達。模型對照組COX-2mRNA陽性細胞主要位于缺血周圍區(qū)，而缺血中心區(qū)陽性細胞明顯減少。缺血再灌注6h后COX-2mRNA陽性細胞

13、數(shù)逐漸增加，至再灌注12h達高峰，持續(xù)24h～3d，然后開始下降，至14d時仍有表達，略高于假手術(shù)組；藻藍蛋白組COX-2mRNA陽性細胞數(shù)量相對較少，其變化規(guī)律與模型對照組相似，與模型對照組同一時間點相比，具有顯著性差異。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)的神經(jīng)元內(nèi)COX-2及COX-2mRNA均高表達，其在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。藻藍蛋白可能通過選擇性抑制COX-2及COX-2mRNA的表達這一途徑來抵抗腦缺血損傷，對腦缺

14、血再灌注損傷具有保護作用。 目的：觀察藻藍蛋白對缺氧/復(fù)氧后PC12細胞的活性及線粒體膜電位的影響。方法：將培養(yǎng)好的PC12細胞制成缺氧/復(fù)氧模型，分為未缺氧組、模型對照組和藻藍蛋白組。用MTT比色法檢測PC12細胞的OD值，觀察細胞的活性及數(shù)量的變化；用共聚焦顯微鏡測定被Rhodamine123標記的PC12細胞內(nèi)的熒光強度，觀察線粒體膜電位的變化。結(jié)果：(1)缺氧/復(fù)氧后模型對照組和藻藍蛋白組的任意時間點的OD值均明顯低于未

15、缺氧組；藻藍蛋白組各時間點的OD值與模型對照組的同一時間點相比明顯增高，具有顯著性差異；藻藍蛋白組和模型對照組，隨著復(fù)氧后培養(yǎng)時間的延長，OD值逐漸增加，各組間相鄰時間點相比，具有明顯差異。(2)缺氧/復(fù)氧后模型對照組和藻藍蛋白組的任意時間點的線粒體膜電位均低于未缺氧組。藻藍蛋白組各時間點的線粒體膜電位與模型對照組的同一時間點相比明顯增高，具有顯著性差異。藻藍蛋白組和模型對照組，隨著復(fù)氧后培養(yǎng)時間的延長，線粒體膜電位逐漸增加，各組間相鄰