NT-3基因修飾嗅鞘細(xì)胞移植促進(jìn)脊髓損傷再生的研究.pdf

1、目的：脊髓損傷是常見疾患，造成許多病人肢體功能的障礙。嗅鞘細(xì)胞(OEG)兼有雪旺氏細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞的雙重功能特點(diǎn)，它能伴從PNS進(jìn)入CNS而不同于雪旺氏細(xì)胞僅局限于PNS中，克服雪旺氏細(xì)胞與成纖維細(xì)胞在脊髓移植中功能的不足；嗅鞘細(xì)胞能在損傷段為再生神經(jīng)纖維形成髓鞘，保護(hù)其不受局部抑制因子的影響；嗅鞘細(xì)胞尚可分泌多種神經(jīng)生長(zhǎng)因子。OEG移植治療脊髓損傷的具有良好的前景。但由于OEG本身表達(dá)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的水平較低，尚不能滿足軸突再生的需要

2、，實(shí)驗(yàn)中在損傷稍遠(yuǎn)處觀察到再生軸突的數(shù)量仍較少。NT-3是NTs家族眾多的成員中最有效的一種，其對(duì)軸突再生的促進(jìn)效果優(yōu)于NGF和BDNF。但由于外源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子不能通過血腦屏障，半衰期短，臨床應(yīng)用上尚缺乏安全有效的給藥途徑。本研究的目的是將攜帶NT-3基因的真核表達(dá)載體，通過非病毒轉(zhuǎn)染途徑轉(zhuǎn)入OEG中，再將轉(zhuǎn)染后OEG移植到脊髓損傷大鼠體內(nèi)，以期促進(jìn)大鼠胸脊髓損傷的恢復(fù)。 方法：將我室自形構(gòu)建的質(zhì)粒pEGFP-NT3，應(yīng)用脂質(zhì)

3、體介導(dǎo)的方法將其導(dǎo)入體外培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞，將其移植入急性脊髓損傷大鼠體內(nèi)，連續(xù)觀察12周時(shí)間，與接受單純OEG、空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染OEG移植的脊髓損傷大鼠進(jìn)行比較。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染后OEG體外可檢測(cè)到NT3mRNA的表達(dá)量的增加，細(xì)胞裂解液可檢測(cè)到NT-3蛋白的表達(dá)，同時(shí)，此上清對(duì)脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活與突起生長(zhǎng)具促進(jìn)作用。移植轉(zhuǎn)染后OEG能在體內(nèi)長(zhǎng)期存活，表達(dá)NT-3基因，并較對(duì)照組更能促進(jìn)脊髓損傷區(qū)軸突的再生和后肢功能的恢復(fù)。 結(jié)論