胃癌及癌前病變中腫瘤相關(guān)基因CpG島高甲基化的研究.pdf

1、背景和目的： 胃癌的發(fā)病是經(jīng)過多個(gè)步驟逐步發(fā)展形成的，是多基因異常表達(dá)的結(jié)果。DNA甲基化在腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮主要的作用。本文擬通過檢測(cè)胃癌、癌前病變和正常對(duì)照組中p16基因、錯(cuò)配修復(fù)基因(hMLH1)和鈣粘蛋白(E-cadherin，E-CD)基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化水平及其表達(dá)，并結(jié)合臨床病理資料，分析它們?cè)谖赴┌l(fā)生、發(fā)展中的作用。 材料和方法 1.病例分組為三組，分別是胃癌41例，癌前病變(慢性

2、萎縮性胃炎、腸化生及不典型增生)40例及正常對(duì)照(淺表胃炎或正常胃粘膜)38例。 2.用甲基化特異性PCR(Methylation-SpecificPCR,MSP)檢測(cè)胃癌、癌前病變和正常對(duì)照組中p16、hMLH1和E-CD基因啟動(dòng)子5'CpG島甲基化，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆并測(cè)序。 3.免疫組化檢測(cè)相關(guān)的基因蛋白表達(dá)。 結(jié)果 1.p16基因啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島甲基化及其表達(dá) 胃癌中甲基化陽(yáng)性率為5

3、6.09％(23/41)，癌前病變?yōu)?7.50％(7/40)，而正常對(duì)照為2.63％(1/38)，前組較后兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。胃癌中p16基因表達(dá)陽(yáng)性率為51.22％(21/41)，癌前病變?yōu)?0.00％(36/40)，正常對(duì)照為100.00％(38/38)，前組較后兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 未分化型胃癌的甲基化陽(yáng)性率(81.25％)明顯高于分化型(40％)(P＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌其甲基化陽(yáng)性

4、率(80.95％)明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組(30％)(P＜0.05)。甲基化陽(yáng)性率隨浸潤(rùn)深度的增加而增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義(P＞0.05)。甲基化陽(yáng)性率與性別和年齡無(wú)關(guān)。甲基化陽(yáng)性的胃癌，其p16表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于甲基化陰性的胃癌(P＜0.05)。 2.E-CD基因啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島甲基化及其表達(dá) 胃癌中甲基化陽(yáng)性率為19.51％(8/41)，癌前病變?yōu)?.00％(0/40)，而正常對(duì)照0.00％(0/38)，前組較后兩組有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。胃癌中E-CD基因表達(dá)陽(yáng)性率為70.73％(29/41)，癌前病變?yōu)?7.50％(39/40)，正常對(duì)照為100.00％(38/38)，前組較后兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 未分化型胃癌的甲基化陽(yáng)性率(43.75％)明顯高于分化型(4％)(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌其甲基化陽(yáng)性率(80.95％)明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組(30％)(P＜0.05)。甲基化陽(yáng)性率隨胃癌浸潤(rùn)深度的增加而增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意

6、義(P＜0.05)。甲基化陽(yáng)性率與性別和年齡無(wú)關(guān)。甲基化陽(yáng)性的胃癌，其E-CD表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于甲基化陰性的胃癌(P＜0.05)。 3.hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島甲基化及其表達(dá) 胃癌中甲基化陽(yáng)性率為34.15％(14/41)，癌前病變?yōu)?.00％(2/40)，而正常對(duì)照為0％(0/38)，前組較后兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。胃癌中hMLH1基因表達(dá)陽(yáng)性率為60.97％(25/41)，癌前病變?yōu)?5.00％(

7、38/40)，正常對(duì)照為100.00％(38/38)，前組較后兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 未分化型胃癌的甲基化陽(yáng)性率(43.75％)較分化型(28％)增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌其甲基化陽(yáng)性率(38.09％)較無(wú)轉(zhuǎn)移組(30％)增高，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。甲基化陽(yáng)性率與性別、年齡及浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。甲基化陽(yáng)性的胃癌，其hMLH1表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于甲基化陰性的胃癌組織(P＜0.05)。

8、 結(jié)論 1.胃癌組織中存在有p16、E-CD及hMLH1基因啟動(dòng)子5'CpG島高甲基化，并導(dǎo)致其基因表達(dá)率顯著低于正常對(duì)照及癌前病變組織。 2.p16、hMLH1基因甲基化的發(fā)生，從正常、癌前病變到胃癌有逐漸增加的趨勢(shì)，提示其基因CpG島高甲基化有可能作為診斷早期胃癌的一項(xiàng)較為敏感的指標(biāo)。 3.p16基因高甲基化與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 4.E-CD基因的高甲基化與胃癌分化程度、胃壁浸潤(rùn)深度、淋