Avastin滴眼對角膜新生血管抑制作用的實驗及臨床研究.pdf

1、研究背景：
　　角膜透明是以低水平的血管生成因子和高水平的抗血管生成因子為基礎。角膜組織內(nèi)新生血管的增生使角膜失去正常的透明性,是導致視力減退甚至致盲的一個重要原因。角膜新生血管的形成是堿燒傷的顯著特點之一,與視力喪失的關系極為密切。
　　它所引起的眼盲已成為眼科學目前面臨的問題之一[2]。而角膜炎癥,角膜化學燒傷產(chǎn)生的病理性角膜新生血管[1]同時也是同種異體角膜移植術后發(fā)生排斥反應的高危因素。盡管目前治療方法很多,如糖皮質(zhì)

2、激素肝素,環(huán)孢素A,非甾體抗炎藥,沙立度胺,氨甲喋呤[3-6]等,但仍缺乏一種十分安全有效的藥物治療。
　　目前糖皮質(zhì)激素是角膜新生血管的主要的治療藥物之一,但仍有致青光眼,白內(nèi)障等副作用,所以開發(fā)新型有效的角膜新生血管抑制藥物具有重大意義。
　　目的：
　　分別建立家兔角膜堿燒傷模型和縫線誘導新生血管的方法,同時比較觀察應用Avastin滴眼液和含激素滴眼液兩種不同藥物方法在不同時期抑制角膜新生血管的效果,從而為臨床

3、尋找一種既簡單易行,又經(jīng)濟有效的角膜新生血管治療方法;臨床收集24例(31眼)角膜新生血管病例,觀察應用Avastin滴眼液對人角膜新生血管的抑制作用和安全性。
　　方法實驗一:
　　Avastin滴眼液對兔角膜堿燒后角膜新生血管形成的抑制作用(1)以堿燒傷法(1mol/LNaOH溶液)誘導角膜新生血管的生成;(2)各組均于堿燒傷后第7d給予相應藥物滴眼,4次/d,共14d;(3)通過裂隙燈觀察并記錄堿燒傷后第7d、14d、

4、28d、56d角膜情況,拍照計算角膜新生血管面積;免疫組織化學法檢測角膜組織中VEGF蛋白的表達;RT-PCR法檢測角膜組織中VEGFmRNA的表達;酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測房水內(nèi)VEGF的表達。
　　實驗二:
　　Avastin滴眼液對兔角膜縫線后角膜新生血管形成的抑制作用(1)以縫線法誘導角膜新生血管的生成;(2)、(3)均與實驗一相同。
　　實驗三:
　　Avastin滴眼液對人角膜新生血管形成的抑制作用(1

5、)納入符合標準的病人,告知并自愿接受治療;(2)給藥:Avastin滴眼液,4次/d,共14d。(3)用藥第7d、14d時通過裂隙燈觀察并記錄角膜情況,拍照計算角膜新生血管面積;觀察并詢問病人用藥后情況,評價安全性。
　　結果:
　　實驗一:
　　(1)成功制備兔角膜堿燒傷后新生血管模型;(2)給予各組不同藥物治療14d后,不同時間點Avastin組角膜新生血管均明顯較對照組短而稀疏;RT-PCR檢測結果顯示,在傷后2

6、1d、28d時,Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達均較對照組低。56d時,Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達較對照組高;ELISA法顯示,兔角膜房水中VEGF含量于21d時明顯低于對照組,說明此藥物可有效滲透角膜,使房水中的VEGF含量下降。
　　實驗二:
　　(1)成功制備兔角膜縫線法誘導新生血管模型;(2)給予各組不同藥物治療14d后,不同時間點Avastin組新生血管面積值與帕利百和對照

7、組均有顯著性差異;RT-PCR檢測結果顯示,在縫線后21d、28d時,Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達均較對照組低。而56d時,Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達較對照組高;ELISA法檢測兔角膜房水中VEGF的含量結果顯示:縫線后21d時,Avastin組房水中的VEGF含量較帕利百和對照組均低。隨著時間的延長,傷后28d時,三組房水中的VEGF含量趨于一致,統(tǒng)計學無明顯差異;而縫線后56d時,帕利百

8、和對照組房水中的VEGF含量較Avastin組突發(fā)性的增加,統(tǒng)計學有意義。
　　實驗三:
　　(1)納入符合標準病人24例,共31只眼。(2)31例患眼用藥7d、14d后角膜新生血管面積明顯減少,分別為用藥前的60.70±21.08％,40.26±21.52％。其中18眼視力有不同程度的提高。(3)31例患眼用藥后安全性評價計分均為0分,未觀察到角膜水腫、角膜上皮脫落、角膜潰瘍不愈合、虹膜睫狀體炎、虹膜萎縮及晶狀體損傷現(xiàn)象;

9、未出現(xiàn)皮膚過敏反應和毒性損傷等全身不良反應。
　　結論:
　　(1)角膜堿燒傷急性炎癥期過后,給予Avastin眼液滴眼可有效控制新生血管的生長,且在用藥后可減少新生血管面積。在停藥后短期內(nèi)觀察,未見新生血管面積的再增長。
　　(2)對于縫線引起的角膜新生血管,Avastin眼液滴眼能控制并促使新生血管消退。但在停藥后,由于縫線刺激長期存在,新生血管仍會繼續(xù)生長。因此,提示不同刺激因素引起的角膜新生血管應提供不同的用藥