微管蛋白輔助因子A(tubulin cofactor A,TBCA)在腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、目的：微管蛋白輔助因子A(tubulincofactorA,TBCA)在調(diào)控細(xì)胞微管折疊和α/β-tubulin二聚體形成過(guò)程中起著非常重要的作用。然而,其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用尚不明確。我們?cè)噲D驗(yàn)證TBCA在腎透明細(xì)胞癌組織和細(xì)胞系中存在差異性表達(dá),并且進(jìn)一步嘗試證明TBCA可正向調(diào)控腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移,為下一步發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌新的診斷和治療靶點(diǎn)奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：利用qRT-PCR,免疫組化和免疫印跡(We

2、sternblot)的方法檢測(cè)TBCA和β-tubulin在腎透明細(xì)胞癌和配對(duì)癌旁組織以及腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系和正常腎小管上皮細(xì)胞系中的表達(dá)。應(yīng)用MTS法檢測(cè)過(guò)表達(dá)和敲除TBCA的腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系的增殖情況并繪制生長(zhǎng)曲線,同時(shí)通過(guò)平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成的方法探明TBCA對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖的作用。利用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)揭示TBCA在影響腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲和遷移中的作用。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TBCA過(guò)表達(dá)和敲除后腎癌

3、細(xì)胞的周期分布差異以及凋亡差異。利用免疫熒光的方法檢測(cè)TBCA對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞骨架完整性的影響。進(jìn)一步利用Westernblotting方法驗(yàn)證敲除TBCA后腎癌細(xì)胞表達(dá)周期相關(guān)蛋白的差異。
　　結(jié)果：qRT-PCR,Westernblot及免疫組化檢測(cè)證實(shí),TBCA在腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本和細(xì)胞株中相比其配對(duì)的正常腎癌旁組織和正常腎小管上皮細(xì)胞呈顯著高表達(dá)。沉默TBCA表達(dá)可明顯抑制786-O細(xì)胞和Caki-1細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)78