青少年特發(fā)性脊柱側凸褪黑素受體及5—羥色胺受體基因多態(tài)性初步研究.pdf

1、研究背景:脊柱側凸是脊柱偏離中線形成側方弧度并合并旋轉的三維畸形，其中其中80％是病因不明的特發(fā)性脊柱側凸(IS)，好發(fā)于青少年，是小兒骨骼肌肉系統(tǒng)中最常見的畸形之一。但到目前為止，所有關于AIS病因的研究尚無定論。目前對AIS病因的廣泛研究包含多種方面：從不同動物模型到AIS病人的血及活體標本的組織學、免疫熒光、遺傳及分子生物領域的研究，再到AIS患者的影像學、激素、神經(jīng)學研究等等。 有關AIS的內(nèi)分泌方面的病因假說研究比較廣

2、泛和深入。褪黑素、5-羥色胺、生長激素、鈣調蛋白等對于AIS的發(fā)生和發(fā)展的作用引起了諸多研究與討論。 褪黑素是一種由松果體分泌的激素，它的缺乏據(jù)推測可能干擾本體感覺系統(tǒng)(椎旁肌和脊柱)的正常對稱生長，從而形成脊柱側凸。摘除雞松果體可誘導出實驗性脊柱側凸并且發(fā)現(xiàn)，在側凸的度數(shù)、椎體的旋轉方向、涉及椎體的數(shù)目、脊柱彎曲的發(fā)展上，松果體切除術后所引起的雞脊柱側凸畸形與人類特發(fā)性脊柱側凸極其相似。早期移植松果體或給予褪黑素可以預防脊柱側

3、凸的發(fā)生，在手術之后立即開始給予褪黑素治療，可成功地降低脊柱側凸地發(fā)病率，如果已經(jīng)存在脊柱側凸，則會減輕側凸的嚴重程度。在大量的實驗基礎上，人們發(fā)現(xiàn)褪黑素缺乏可以導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的紊亂，包括下丘腦、腦干、小腦和脊髓，可能會進一步導致軀體的失衡，脊柱和椎旁肌的不對稱發(fā)育。近年來，已證明在雞的脊髓背側灰質中，存在著大量的褪黑素結合的位點，這表明褪黑素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)調節(jié)脊柱生長發(fā)育方面具有重要作用。目前發(fā)現(xiàn)褪黑素受體廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)

4、中。學者們認為，有關褪黑素受體在脊柱側凸動物致病中的研究也許是特發(fā)性脊柱側凸病因學研究的突破點。 平衡反射的破壞可能是特發(fā)性脊柱側凸的發(fā)病機制之一。而5-HT對維持正常姿勢性肌肉張力和姿勢平衡上起重要作用。研究顯示小腦共濟失調患者的不平衡可通過長期給予5-HT得到部分緩解。而99％的脊柱側凸患者在姿勢反射上是異常的。這種異常可見于本體感受和光學反射系統(tǒng)中。他們認為這種姿勢反射的破壞可能是脊柱側凸進展的原因。給松果體摘除雞每天腹腔

5、內(nèi)注射5-羥色氨酸，結果表明，5-羥色胺缺乏可能破壞平衡肌張力和姿勢平衡，從而產(chǎn)生側彎，同時5-羥色胺在預防脊柱側凸發(fā)展上有重要治療作用。 目的:通過將特發(fā)性脊柱側凸患者的褪黑素受體基因以及5-羥色胺受體基因單核苷酸多態(tài)性位點與對照組進行相互對比研究，觀察特發(fā)性脊柱側凸患者褪黑素受體基因以及5-羥色胺受體基因單核苷酸多態(tài)性位點的特點，探究基因多態(tài)性與特發(fā)性脊柱側凸的關系。同時結合患者臨床資料、流行病學調查統(tǒng)計資料，分析基因多態(tài)性

6、與臨床表型、與危險因素以及基因與基因之間的相互關系，以進一步探討基因在疾病發(fā)生中作用。 方法:結合AIS病因學中內(nèi)分泌假說與《家族性特發(fā)性脊柱側凸候選基因定位》研究結果，參照人類基因組計劃成果以及最新文獻報道，確立了9個候選基因，包括褪黑素、生長激素、鈣調蛋白、5-HT的受體基因。臨床收集25例特發(fā)性脊柱側凸患者和25例性別年齡匹配的對照組患者(主要為外傷、感染者)的血液樣本，采用DNA提取、PCR基因擴增以及基因測序的方法，統(tǒng)

7、計上述基因多態(tài)性位點情況，進行對比研究，觀察各基因型的分布特點。完善實驗對象的臨床資料和流行病學調查問卷，分析基因多態(tài)性與臨床表型、與危險因素以及基因與基因之間的交互關系。 結論: 1、褪黑素受體基因的單核苷酸多態(tài)性位點(ID：rs8192552)在本實驗中沒有多態(tài)性，與國外文獻報道有差別，可能在漢族人口中是保守的或雜合度較低。 2、脊柱側凸的患者存在畸形生長，發(fā)育高峰提前，在15歲前身高較同齡正常兒童要高，大于

8、15歲則沒有顯著差別。 3、坐姿不正有可能是促進和加重側凸的環(huán)境因素，但也應注意有無研究對象主觀傾向的可能。 4、褪黑素受體1B基因的多態(tài)性位點rs1562444其基因型雜合狀態(tài)“AG”頻率顯著低于對照組，可能在人群中有保護作用，換言之，有可能該位點的純合狀態(tài)基因型是脊柱側凸的易感基因。 5、本研究3個位點的基因型與臨床表型之間尚未發(fā)現(xiàn)相關。 6、褪黑素受體1B基因的多態(tài)性位點rs1562444純合狀態(tài)基