HBV啟動子調控的肝細胞高表達載體構建及抑癌作用研究.pdf

1、肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,每年使大約100萬例病人死亡,盡管目前肝癌的治療方法很多,但仍未能從根本上改變病人的預后.近年來肝癌的基因治療已經(jīng)成為生物醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究的熱點.肝癌基因治療的靶向性調控,即調控目的基因特異性導入肝癌細胞或在肝癌細胞中實現(xiàn)特異性表達,最大限度地殺傷肝癌細胞的同時而不損傷正常肝細胞,已成為決定基因治療效果及可行性的關鍵因素.分子病毒學研究揭示了HBV的表達調控機制,為利用HBV嗜肝細胞基因表達調控特性構建肝細

2、胞特異表達載體提供了條件.HBV基因組僅有3.2kb,結構緊密,所有調控序列均位于蛋白編碼區(qū).HBV 3.5kb、2.4kb、2.1kb和0.9kb的RNA轉錄物的起始點附近各有一個啟動子,分別為C、SPⅠ、SPⅡ和X啟動子.另外在1074~1234位核苷酸和1627~1774位核苷酸處有HBV的兩個增強子ENⅠ和ENⅡ.該兩段序列具有高度保守性,并在其上有多個肝特異轉錄因子的結合位點,與ENⅠ結合的轉錄因子有肝細胞特異性的C/EBP、

3、HNF-4和HB<,1>F,與ENⅡ相結合的肝細胞蛋白因子有C/EBP、HNF-4、HLF、HNF3、FTF和E4BP4等.由于與HBV的啟動子和增強子特異結合的轉錄表達調控因子幾乎只存在于肝細胞中,而不存在于其它細胞中,決策了肝細胞增強子ENⅠ和ENⅡ具有高度肝細胞專一性,其對HBV在肝細胞中的特異表達有相當重要的貢獻,并在一定程度上決策了HBV的嗜肝性.因此,以HBV病毒嗜肝細胞表達密切相關的啟動子、增強子為表達調控元件構建肝細胞特

4、異表達載體攜帶只對腫瘤細胞起抑制或促調亡作用的治療基因導入人體后,便可達到殺傷肝癌細胞而對正常肝細胞或非肝細胞無影響的目的,充分體出了基因治療的優(yōu)勢.據(jù)此,該論文擬進行以下研究:(1)克隆不同的HBV啟動子片段,評價其在肝細胞和非肝細胞中的轉錄活性.篩選出在肝細胞中特異性表達最強的DNA序列組合形式.(2)構建HBV啟動子調控的外源端粒酶hTRT反義RNA,apoptin,IL-24和OSM基因載體,并檢測各種治療基因在體內外的抑癌作用