重組人尿胰蛋白酶抑制劑對實驗性胰腺炎動物的保護作用及其機理研究.pdf

1、目的：探討重組人尿胰蛋白酶抑制劑（rhUTI）對實驗性胰腺炎動物的保護作用及其可能的作用機制，為其申報國家一類新藥與臨床應用提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用2％?；悄懰徕c（0.1mL/100g，0.2mL/min）胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎大鼠模型。將實驗大鼠隨機分成6組：即對照組、模型（AP）組、rhUTI（1.75、3.5、7萬U/kg）3個不同劑量組及陽性藥烏司他?。║TI，3.5萬U/kg）組，每

2、組10只。實驗結(jié)束時，分別檢測大鼠血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以及胰腺病理組織學損傷的變化。
　　 2.采用2.5％?；悄懰徕c（1ml/kg）胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎犬模型。將實驗犬隨機分成6組：即對照組、模型（AP）組、rhUTI（0.75、1.5、3萬U/kg）3個不同劑量組及陽性藥烏司他?。║TI，1.5萬U/kg）組，每組6只。實驗結(jié)束時，分別檢測犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以

3、及胰腺病理組織學損傷的變化。
　　 3.采用TUNEL法檢測急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細胞凋亡情況；采用免疫組化染色法分別觀察急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白表達的變化；采用RT-PCR法分別檢測急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3mRNA表達的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)胰膽管逆行注射2％?；悄懰徕c成功制備急性胰腺炎大鼠模型，與對照組比較，AP組大鼠

4、的血清淀粉酶、尿液淀粉酶，紅細胞計數(shù)，尿素氮、肌酐升高，血清Ca2+降低，胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細胞浸潤。與AP組比較，UTI（3.5萬U/kg）及rhUTI（3.5、7萬U/kg）對升高的血清淀粉酶、尿液淀粉酶有降低作用，UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小，炎性細胞浸潤減輕，但UTI和rhUTI各劑量對急性胰腺炎大鼠血常規(guī)、腎功能和電解質(zhì)變化均未見明顯影響。
　　 2.經(jīng)胰膽管逆行注射

5、2.5％?；悄懰徕c成功制備急性胰腺炎犬模型，與對照組比較，AP組犬血清淀粉酶于造模后24h、28h和32h升高，且32h達到高峰，尿液淀粉酶于造模后32h升高，胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細胞浸潤，血清K+和Ca2+分別于造模后24h、8h降低，血常規(guī)、腎功能均未見明顯變化。與AP組比較，UTI和rhUTI各劑量于造模后28h、32h對升高的血清淀粉酶有降低作用，rhUTI（1.5、3萬U/kg）和UTI（1.5萬U/kg）

6、對升高的尿液淀粉酶有降低作用，胰腺病理組織學檢測結(jié)果表明：UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小，炎性細胞浸潤減輕。
　　 3.TUNEL法檢測結(jié)果顯示，正常組大鼠胰腺腺泡細胞凋亡極少，急性胰腺炎時腺泡細胞凋亡指數(shù)升高，病變程度較重的模型組凋亡細胞少見，與AP組比較，UTI及rhUTI各劑量組凋亡細胞明顯增多。免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示，在正常組大鼠胰腺組織中即有Fas、Fas-L和 Caspase-3蛋

7、白及mRNA的弱陽性表達，與對照組比較，AP組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和 Caspase-3的蛋白及mRNA表達水平均降低；與AP組比較，UTI和rhUTI各劑量組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和 Caspase-3的蛋白及mRNA表達水平明顯升高，且Caspase-3表達水平在各個組間的變化趨勢與 Fas/Fas-L系統(tǒng)的變化趨勢相一致。
　　 結(jié)論：rhUTI對急性胰腺炎大鼠和犬有一定的保護作用，可抑制淀粉酶活性，