咬合升高和咬合創(chuàng)傷對牙體牙髓組織的影響.pdf

1、本課題擬通過建立成年大鼠咬合垂直距離升高和咬合創(chuàng)傷動物模型，觀察牙體牙髓組織的病理變化，并采用SABC免疫組織化學法觀察大鼠磨牙牙髓中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶分布的改變，探討咬合升高和咬合創(chuàng)傷對牙體牙髓組織的影響及一氧化氮在牙髓炎癥和修復(fù)過程中的作用。 方法: 選擇90只體重為275±25 g的Wistar雄性成年期大鼠，分為3天、1周、2周、3周、4周五個大組，每組18只，每個大組按體重隨機分為正常對照組、咬合垂直距離升高組

2、(iOVD)和咬合創(chuàng)傷組(OT)3個亞組。其中OVD升高組大鼠戴雙側(cè)上頜后牙平衡咬合板，OT組大鼠僅右側(cè)戴創(chuàng)傷咬合板，正常對照組不做特殊處理。運用現(xiàn)代修復(fù)技術(shù)，包括精細印模技術(shù)和粘接技術(shù)完成OVD升高和OT咬合板的制作和粘接。自咬合板粘固起，每天稱量大鼠體重，觀察營養(yǎng)情況、咬合穩(wěn)定性，檢查咬合板有無松動、脫落等。 分別于實驗3天、1周、2周、3周、4周后，大鼠腹腔注射5﹪水合氯醛深度麻醉，4﹪多聚甲醛行心臟灌注固定，取雙側(cè)下頜第

3、一磨牙區(qū)骨段作為石蠟切片標本，置于4﹪多聚甲醛中再浸泡固定48 h。標本用10﹪中性EDTA脫鈣，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，沿近遠中方向縱行切片，片厚4μm，裱于玻片備用。選擇結(jié)構(gòu)完整切片行HE染色，光學顯微鏡下觀察牙體牙髓組織病理改變。SABC免疫組織化學染色，一抗選用兔抗鼠iNOS多克隆抗體(Santa Cruz)，應(yīng)用Axiocam HRC成像系統(tǒng)在光學顯微鏡(×400)下采集冠部牙髓數(shù)字化圖像，用Image-Pro plus 5.

4、0圖像分析軟件測量牙髓中iNOS表達的平均光密度值，進行半定量分析。實驗數(shù)據(jù)納入SPSS13.0統(tǒng)計軟件包作t檢驗和(或)單因素方差分析和SNK檢驗。 結(jié)果: 1．OVD升高組和OT組大鼠雙側(cè)下頜第一磨牙牙髓組織均出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。炎癥變化表現(xiàn)為程度不等的血管擴張充血、紅細胞外滲、組織水腫，巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞等炎性細胞浸潤。OVD升高組炎癥程度輕于OT組，OT組創(chuàng)傷側(cè)較對側(cè)嚴重。 2．OT組創(chuàng)傷側(cè)和OVD

5、升高組雙側(cè)下頜第一磨牙根分叉區(qū)牙骨質(zhì)病理變化表現(xiàn)為炎癥．破壞．修復(fù)的過程。OT組左側(cè)下頜第一磨牙3周組和4周組分別有2例和1例出現(xiàn)蟲蝕狀牙骨質(zhì)吸收，余27例未發(fā)生破壞。 3．正常大鼠牙髓中iNOS呈陰性或弱陽性表達，僅分布在成牙本質(zhì)細胞及其突起中，呈淺棕色。咬合升高和咬合創(chuàng)傷不同時間組iNOS在分布和表達強度上有不同程度的改變，iNOS陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈深棕色均質(zhì)沉淀，在牙髓中主要分布于成牙本質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞和成纖維細胞胞漿內(nèi)。

6、 OT組創(chuàng)傷側(cè)iNOS在2周時表達最強，OVD升高組和OT組左側(cè)3周時表達最強。 4．咬合升高2周組與3天組、3周組與3天組牙髓中iNOS的表達強度相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。咬合創(chuàng)傷右側(cè)2周組與3天組、3周組與3天組牙髓中iNOS的表達強度相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，咬合創(chuàng)傷組左側(cè)3天、1周與3周組差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。咬合創(chuàng)傷2周組iNOS在創(chuàng)傷側(cè)牙髓中的表達較對側(cè)強，差異有統(tǒng)計學意義(

7、P<0.05)。OVD升高各個時間組iNOS在左右牙髓中的表達均無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: 1．大鼠牙髓組織對適度升高的咬合垂直距離表現(xiàn)為適應(yīng)性反應(yīng)。 2．咬合創(chuàng)傷可誘發(fā)牙髓炎癥，單側(cè)咬合創(chuàng)傷可引起牙髓出現(xiàn)雙側(cè)炎癥反應(yīng)。 3．生理條件下iNOS在大鼠牙髓中呈陰性或弱陽性表達，咬合升高和咬合創(chuàng)傷牙髓中iNOS表達呈先升高后降低。 4．NO可能通過調(diào)節(jié)牙髓微循環(huán)、牙髓細胞分化和炎性細胞活性