哈密瓜內(nèi)生拮抗細(xì)菌抗菌活性物質(zhì)研究.pdf

1、本論文從378株哈密瓜內(nèi)生細(xì)菌中篩選出了對(duì)瓜類(lèi)細(xì)菌性葉斑病菌、疫霉病菌具有高抗菌活性的拮抗菌株，研究了拮抗菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的種類(lèi)、性質(zhì)、穩(wěn)定性、產(chǎn)生條件及抗菌機(jī)制，為內(nèi)生生防菌抗菌機(jī)制的分子生物學(xué)和遺傳改良研究，挖掘新的抗病基因資源，創(chuàng)制優(yōu)良生防制劑提供科學(xué)基礎(chǔ)。 研究結(jié)果顯示：在哈密瓜內(nèi)生細(xì)菌中廣泛存在具有高抗菌活性的菌株。通過(guò)測(cè)定拮抗菌株胞外代謝產(chǎn)物的抑菌活性，復(fù)篩出胞外代謝物中活性較高的抑菌物質(zhì)，其中194、197菌株的胞

2、外代謝物表現(xiàn)出高抗菌活性．溫室生物測(cè)定證明，197菌株的菌體和胞外代謝物對(duì)細(xì)菌性葉斑病菌和疫霉病菌具有雙重顯著抗菌活性，還同時(shí)具有促進(jìn)種子發(fā)芽和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，胞外代謝物防病效果較菌體更為顯著。 對(duì)內(nèi)生拮抗菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的初步分析表明，試驗(yàn)分離篩選出的內(nèi)生拮抗菌株能產(chǎn)生細(xì)菌素，幾丁質(zhì)酶，嗜鐵素等多種抑菌代謝產(chǎn)物，產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)是其抗菌作用的重要機(jī)制。 對(duì)試驗(yàn)篩選出的高拮抗活性菌株197的抗菌物質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，

3、197菌株的代謝抗菌物質(zhì)為蛋白質(zhì)類(lèi)，可通過(guò)15﹪-90﹪的(NH<,4>)<,2>SO<,4>鹽析和濃縮，其蛋白含量與其抗菌活性呈正相關(guān)，75﹪(NH<,4>)<,2>SO<,4>是抗菌蛋白提取的最適鹽析飽和度。 采用PAGE和SDS-PAGE凝膠電泳法從197菌株的粗蛋白提取物中檢測(cè)分離到了P5-3和P5-6兩種抗菌蛋白成分。對(duì)其中抑菌活性較強(qiáng)P5-3抗菌蛋白進(jìn)行純化，得到了電泳純的抗菌蛋白，分子量約為45KD，有兩條鏈組成。

4、該抗菌蛋白與已報(bào)道的抗菌蛋白有一定差別，可能為一種新的未知抗菌蛋白。 該抗菌蛋白具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，120℃高溫處理10min仍能保持部分抑菌活性。對(duì)pH值適應(yīng)范圍較寬，在pH8的堿性條件下更為穩(wěn)定。對(duì)蛋白酶K敏感，對(duì)胰蛋白酶部分敏感，對(duì)紫外線有很強(qiáng)的穩(wěn)定性，4℃低溫下存放42天后仍可保持抑菌活性。 197菌株抗菌蛋白抗菌譜的測(cè)定結(jié)果顯示，該抗菌蛋白抗菌譜較廣，對(duì)多種病原菌具有抗菌作用。其抗菌作用表現(xiàn)在能顯著抑制疫霉菌孢