福氏2a志賀氏菌2457T mxiE基因功能的研究.pdf

1、志賀氏菌屬(Shigellaspp.)細菌俗稱痢疾桿菌，是一類兼性厭氧、不產(chǎn)生芽孢的革蘭氏陰性桿菌，可以侵入結腸上皮，并在結腸中繁殖，導致強烈的炎癥反應和上皮損傷。據(jù)WHO統(tǒng)計，全球每年約有1.647億人感染痢疾，110萬人死亡，大多數(shù)為發(fā)展中國家的兒童。福氏志賀氏菌是發(fā)展中國家主要的感染菌株，福氏2a志4賀氏菌是主要的血清型。我國每年大約有2000萬人次感染痢疾，感染或大流行的痢疾桿菌中50-70％是由福氏2a志賀氏菌引起的，因此，福

2、氏2a志賀氏菌的基礎研究對于我國衛(wèi)生防疫工作尤為重要。 志賀氏菌毒力基因的表達和調控對其致病性至關重要。迄今為止，痢疾桿菌毒力基因和致病性的關系還不明晰。因此，探求已知毒力因子作用的分子機制，尋找新的毒力基因成為志賀氏菌研究的熱點。 Mxi-spa基因簇位于福氏志賀氏菌的毒力質粒，編碼細菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)的組成成分。mxiE即定位于此基因簇，編碼一個與AraC/XylS轉錄調節(jié)子家族同源的蛋白，其在志賀氏菌侵襲過程中所起的作

3、用甚不清楚。本研究采用改進的λ-Red重組系統(tǒng)成功構建了mxiE基因缺失突變株，對突變株進行了生理生化特征研究。結果表明：mxiE的缺失對菌體的生長影響不大；相比于野生株，突變株利用甘露糖的能力增強，而利用葡萄糖的能力降低。 突變株和野生株的毒力蛋白差異表達是評價基因功能的一個重要依據(jù)。本研究采用WesternBlotting方法考察了突變株和野生株毒力蛋白IpaB(侵襲所需的效應因子)的分泌能力；采用雙向凝膠電泳建立了不同生長

4、時期、誘導條件下，野生株和mxiE突變株的雙向電泳圖譜，并對差異點進行了膠內(nèi)酶切和質譜鑒定。結果表明：mxiE基因缺失突變株依然分泌毒力蛋白IpaB；在不同生長時期和誘導條件下，野生株和mxiE突變株的雙向電泳呈現(xiàn)差異，毒力相關蛋白PhoN2、OmpA和HtrA在mxiE基因缺失突變株中表達下調。 評價mxiE基因的功能，除了在蛋白水平上研究毒力蛋白的表達差異，還需通過動物實驗模型進行功能驗證。本研究采用豚鼠角膜侵襲實驗、細胞侵