Toll樣受體(TLR)2、TLR3、TLR4和TLR9在華支睪吸蟲感染小鼠肝臟中動態(tài)表達的初步研究.pdf

1、目的：本研究擬應(yīng)用華支睪吸蟲感染小鼠動物模型，觀察Toll樣受體(TLR)2、TLR3、TLR4和TLR9在肝臟組織中的動態(tài)表達，為探討其在華支睪吸蟲免疫致病機制中的作用提供依據(jù)。
　　 方法：1．建立華支睪吸蟲感染小鼠模型：參考本實驗室前期實驗研究，實驗動物選用健康雌性Balb/c小鼠64只，隨機取40只作感染組，24只作正常組。其中，感染組小鼠按35個/只華支睪吸蟲囊蚴經(jīng)口灌入小鼠胃內(nèi)，再用適量生理鹽水沖洗，以保證囊蚴的飼入

2、。正常組小鼠只給予生理鹽水灌胃。2．分別于感染后第1d、2d、4d、7d、14d、28d、56d、84d頸椎脫位處死感染組小鼠5只，正常組小鼠3只。無菌低溫操作取肝臟左外葉組織，以肝門為界分為上下兩部分，上部分肝組織置凍存管中放入液氮保存，用于抽提總RNA；下部分肝組織用4％多聚甲醛固定48h，常規(guī)法石蠟包埋、切片、HE染色后觀察感染各期小鼠肝臟病理變化。3．采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測感染各期小鼠肝臟組織TLR2、TLR

3、3、TLR4、TLR9mRNA表達水平。
　　 結(jié)果：1．病理學(xué)觀察：感染后第1d，童蟲寄生大膽管周圍有炎癥反應(yīng)；第2d，匯管區(qū)輕度炎癥反應(yīng)；第4d，肝細胞有水樣變性；第7d，匯管區(qū)炎癥反應(yīng)加重；第14d，匯管區(qū)可見嗜酸性膿腫、纖維組織增生、炎性細胞浸潤；第28d，小膽管增生趨于明顯，膽管周圍纖維組織增生和炎性滲出明顯，肝細胞呈片狀壞死；第56d，膽管上皮有不同程度的增生、增生的上皮呈腺樣結(jié)構(gòu)；第84d，膽管周圍炎性細胞減少、纖

4、維增多、管壁增厚。2．正常組和感染組各時間點肝臟組織TLR2、TLR3、TLR4、TLR9mRNA均表達。與正常組相比，感染組TLR2、TLR4mRNA表達量自感染后第7d起開始升高(P＜0.05)，至第28d達到高峰后開始下降，至第56d仍高于正常組（P＜0.05），直至第84d下降至與正常組相近水平；TLR3、TLR9mRNA在各個時相的表達無顯著差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：1．華支睪吸蟲感染小鼠肝內(nèi)膽管病變由早期大