婦科惡性腫瘤細胞系RASSF1A基因啟動子區(qū)域甲基化及對其表達的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：婦科惡性腫瘤細胞系RASSF1A基因表達及其啟動子區(qū)域DNA甲基化檢測
　　 目的：研究婦科惡性腫瘤細胞系Ras相關結構域家族1A（Ras-association Domain Family 1A Gene，RASSF1A）基因啟動子區(qū)域DNA甲基化水平及RASSF1A基因表達；探討婦科惡性腫瘤細胞系RASSF1A基因甲基化與其表達的關系。
　　 方法：選取9株婦科腫瘤系A27

2、80、Anglne、Caov3、COC1、SKOV3、HEC-1B、Ihsikawa、Hela、Siha為研究對象，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT－PCR）技術及甲基化特異性聚合酶鏈反應（Methylation-specific PCR，MSP）技術檢測這9株婦科惡性腫瘤細胞系中RASSF1A基因mRNA表達水平及其啟動子區(qū)域的DNA甲基化狀態(tài)。
　　 結果：在A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ish

3、ikawa細胞系中RASSF1A基因啟動子區(qū)域存在DNA超甲基化，在COC1、Hela和Siha中RASSF1A啟動子區(qū)域存在DNA部分甲基化。同時檢測到A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ishikawa細胞系中RASSF1A表達水平極低，而COC1、Hela和Siha中RASSF1A表達水平較高。
　　 結論：婦科腫瘤細胞系中普遍存在RASSF1A基因甲基化，RASSF1A基因啟動子區(qū)域DNA高甲

4、基化是抑制其表達的機制之一。
　　 第二部分：5－雜氮－2'－脫氧胞苷對卵巢癌SKOV3細胞系RASSF1A基因甲基化及其表達的影響
　　 目的：探討去甲基化試劑5－雜氮－2'-脫氧胞苷(5-2aza-CdR)對卵巢癌細胞系SKOV3中RASSF1A基因的甲基化及表達的影響和對SKOV3細胞的增殖活性和侵襲能力的影響。
　　 方法：用MSP、RT-PCR分別檢測5-2aza-CdR對SKOV3細胞系干預前后細胞系

5、RASSF1A基因甲基化狀態(tài)及mRNA轉錄情況。用四唑鹽比色法（MTT法）檢測處理前后SKOV3細胞系的增殖活性，Transwell侵襲實驗用來觀察5-2aza-CdR對SKOV3細胞系侵襲能力的影響。
　　 結果：
　　 1. 經5-2aza-CdR去甲基化處理后，SKOV3細胞系的RASSF1A基因啟動子區(qū)域DNA未甲基化水平上升，甲基化水平降低；5-2aza-CdR處理后其mRNA轉錄水平較未處理者升高。