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文檔簡介
1、本研究分為二部分:
第一部分:婦科惡性腫瘤細胞系RASSF1A基因表達及其啟動子區(qū)域DNA甲基化檢測
目的:研究婦科惡性腫瘤細胞系Ras相關結構域家族1A(Ras-association Domain Family 1A Gene,RASSF1A)基因啟動子區(qū)域DNA甲基化水平及RASSF1A基因表達;探討婦科惡性腫瘤細胞系RASSF1A基因甲基化與其表達的關系。
方法:選取9株婦科腫瘤系A27
2、80、Anglne、Caov3、COC1、SKOV3、HEC-1B、Ihsikawa、Hela、Siha為研究對象,采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術及甲基化特異性聚合酶鏈反應(Methylation-specific PCR,MSP)技術檢測這9株婦科惡性腫瘤細胞系中RASSF1A基因mRNA表達水平及其啟動子區(qū)域的DNA甲基化狀態(tài)。
結果:在A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ish
3、ikawa細胞系中RASSF1A基因啟動子區(qū)域存在DNA超甲基化,在COC1、Hela和Siha中RASSF1A啟動子區(qū)域存在DNA部分甲基化。同時檢測到A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ishikawa細胞系中RASSF1A表達水平極低,而COC1、Hela和Siha中RASSF1A表達水平較高。
結論:婦科腫瘤細胞系中普遍存在RASSF1A基因甲基化,RASSF1A基因啟動子區(qū)域DNA高甲
4、基化是抑制其表達的機制之一。
第二部分:5-雜氮-2'-脫氧胞苷對卵巢癌SKOV3細胞系RASSF1A基因甲基化及其表達的影響
目的:探討去甲基化試劑5-雜氮-2'-脫氧胞苷(5-2aza-CdR)對卵巢癌細胞系SKOV3中RASSF1A基因的甲基化及表達的影響和對SKOV3細胞的增殖活性和侵襲能力的影響。
方法:用MSP、RT-PCR分別檢測5-2aza-CdR對SKOV3細胞系干預前后細胞系
5、RASSF1A基因甲基化狀態(tài)及mRNA轉錄情況。用四唑鹽比色法(MTT法)檢測處理前后SKOV3細胞系的增殖活性,Transwell侵襲實驗用來觀察5-2aza-CdR對SKOV3細胞系侵襲能力的影響。
結果:
1. 經5-2aza-CdR去甲基化處理后,SKOV3細胞系的RASSF1A基因啟動子區(qū)域DNA未甲基化水平上升,甲基化水平降低;5-2aza-CdR處理后其mRNA轉錄水平較未處理者升高。
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