重組腺病毒介導(dǎo)的NDRG2基因?qū)θ思谞钕侔┘?xì)胞的體外殺傷作用及機(jī)制.pdf

1、3(1405e68業(yè)代目100602陜西中醫(yī)學(xué)院Shaan村UnivcrsitvofChineseMedicine碩士學(xué)位論文重紀(jì)腺病毒介導(dǎo)的ND要G2基因?qū)萌麗面瓣砑嗓麗研￡夏萬麗學(xué)位申請人專業(yè)名稱申請學(xué)位類型指導(dǎo)教師姓名論文提交日期付強(qiáng)中西醫(yī)結(jié)臺臨床(外科)臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位王建華教授2008年4月癌的診斷和治療也具有一定的重要意義。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)討論DNRG2過表達(dá)之后對甲狀腺腫瘤細(xì)胞的影響。目的：重組腺病毒介導(dǎo)的NDRG2基因A

2、d—NDRG2對甲狀腺癌細(xì)胞株FTC一133的體外殺傷作用及機(jī)制。方法：應(yīng)用體外轉(zhuǎn)染Ad—NDRG2于甲狀腺癌FTC一133細(xì)胞，48h后應(yīng)用倒置顯微鏡觀察腺病毒AdNDRG2轉(zhuǎn)染細(xì)胞后形態(tài)的變化；應(yīng)用RTPCR、Westernblot檢測Ad—NDRG2在FTC133細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)；通過細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT實(shí)驗(yàn)，觀察AdNDRG2對FTC133細(xì)胞生長抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞分析儀(FCM)檢測AdNDRG2對FTC133細(xì)胞凋亡率的變

3、化；應(yīng)用透射電鏡觀察外源性NDRG2對FTC133細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)經(jīng)Ad—NDRG2轉(zhuǎn)染FTC一133細(xì)胞后48h，可見部分細(xì)胞由貼壁脫落而呈懸浮生長，貼壁能力減弱，細(xì)胞形態(tài)變圓，體積縮小，折光性增強(qiáng)，而AdLacZ組及PBS組細(xì)胞正常生長；AdNDRG2轉(zhuǎn)染FTC133細(xì)胞后應(yīng)用RTPCR檢測到NDRG2mRNA的表達(dá)，F(xiàn)TC一133細(xì)胞經(jīng)AdNDRG2轉(zhuǎn)染后能夠表達(dá)特異性NDRG2蛋白，大小約44kDa；經(jīng)AdNDRG

4、2轉(zhuǎn)染后不同時間，其細(xì)胞生長速度明顯低于AdLacZ轉(zhuǎn)染組及PBS組的細(xì)胞；MTT實(shí)驗(yàn)證實(shí)，外源性’NDRG2基因轉(zhuǎn)染顯著抑制了FTC133細(xì)胞的增殖，并隨著時間的延長其抑制率增強(qiáng)，而AdLacZ轉(zhuǎn)染組則無明顯的抑制作用；轉(zhuǎn)染AdNDRG2后的FTC133細(xì)胞經(jīng)FCM檢測，細(xì)胞凋亡率明顯升高；透射電鏡下可見轉(zhuǎn)染NDRG2基因組細(xì)胞則呈典型凋亡征象，細(xì)胞膜完整，核染色質(zhì)邊集。結(jié)論：我們得出的結(jié)論是Ad—NDRG2對甲狀腺癌細(xì)胞株FTC13