流式細胞術研究局灶性大鼠腦缺血再灌注損傷后白細胞滲出和L-選擇素表達.pdf

1、目的：在腦缺血的病理機制中炎癥反應起著重要作用，小神經膠質細胞、巨噬細胞的活化和白細胞的滲出是中樞神經系統(tǒng)炎癥反應的關鍵步驟。腦缺血后炎癥反應有兩個過程：小神經膠質細胞的活化和血管周圍、腦實質內巨噬細胞的出現(xiàn)；周圍炎癥細胞的游走和滲出。粘附分子介導粘附損傷過程和神經細胞損傷的關系密切。選擇素是血管粘附分子大家族中的一大類成員，參與介導腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應，導致缺血區(qū)腦組織損傷。其中L-選擇素表達于多種白細胞，是白細胞表面標志。本

2、課題研究缺血腦組織的L-選擇素表達和白細胞滲出，以說明L-選擇素介導白細胞滲出在腦缺血再灌注損傷中的作用。 過去已經應用形態(tài)學，免疫組化，生物化學的方法來研究動物模型腦缺血病灶的炎癥反應。這些方法在評價炎癥細胞滲出抑制劑的有效性時，通常采用組織切片上細胞計數(shù)的辦法，非常耗時且準確性欠佳。而與這些方法相比較，應用流式細胞術可以定量和定性分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的炎癥細胞，具有速度快、精度高、準確性好等優(yōu)點。 材料和方法

3、：采用機械分離法制備腦單細胞懸液。在流式細胞術中使用如下抗體：FITC-Mouse Anti Rat CD62L，PE-Mouse Anti Rat CD45(白細胞表面抗原)以及相關同型對照抗體。將66只SD大鼠分為假手術組，腦缺血再灌注組(模型組)和人工合成E-選擇素干預組(干預組)，采用線栓法制備大腦中動脈缺血再灌注模型。缺血2h后，設再灌注2h、6h、12h、24h、48h組，采用流式細胞術檢測各組大鼠大腦缺血側L-選擇素表達、

4、白細胞滲出和分析人工合成E-選擇素的抑制作用。。 結果：假手術組無L-selectin和CD45表達；模型組L-selectin在再灌注2h后已經表達，再灌注6h達高峰，再灌注24h、48h明顯減少；模型組CD45表達在再灌注12h后表達逐漸增加；與模型組相比，干預組L-selectin各時間點均下降(P<0.05)，干預組CD45在再灌注12h、24h、48 h時間點的表達明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)。 結論：

5、大鼠腦缺血再灌注損傷后L-selectin的明顯上調，說明它介導白細胞和EC的粘附，參與腦缺血再灌注損傷的病理過程。大鼠腦缺血再灌注的早期白細胞滲出較少，再灌注12h～24h開始有較高的表達，后逐漸增多。人工合成E-選擇素能夠明顯抑制L-selectin的表達，達到抑制白細胞與EC的粘附作用，使白細胞的滲出明顯減少，對大鼠腦缺血再灌注損傷起到保護作用。應用流式細胞術來分析鼠腦組織是可行的，能夠快速、可靠地分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的神