胃癌微環(huán)境中TGF-β1通過調(diào)節(jié)TAM中mir-155的表達影響其表型.pdf

1、目的:研究胃癌微環(huán)境中TGF-β1對腫瘤相關(guān)巨噬細胞中miR-155的表達的影響，以及miR-155的表達變化對TAM表型的影響，以探尋胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞表型改變的可能機制。
　　方法:
　　1、為了觀察胃癌組織中TGF-β1的表達與M2型巨噬細胞的浸潤是否具有相關(guān)性，用免疫組織化學的方法檢測人胃癌組織和正常胃組織中TGF-β1和M2型巨噬細胞表面分子CD163的表達情況。
　　2、為了明確胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞內(nèi)mi

2、R-155的表達變化及導致該變化的可能機制，進行如下實驗:首先，佛波酯誘導人單核細胞株(THP-1)，使其分化為巨噬細胞，用胃癌腫瘤培養(yǎng)上清刺激巨噬細胞為胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞。然后，用熒光定量PCR方法檢測巨噬細胞內(nèi)miR-155的表達，并比較巨噬細胞、胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞以及用TGF-β1刺激的巨噬細胞中miR-155表達差異;最后，用TGF-β1受體阻斷劑刺激胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞，熒光定量PCR方法檢測巨噬細胞內(nèi)miR-155的表達

3、。
　　3、觀察miR-155對巨噬細胞表型的影響:構(gòu)建miR-155真核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染巨噬細胞，ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染后兩組細胞上清內(nèi)IL-10和IL-12的含量。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化結(jié)果表明，CD163作為巨噬細胞的表面分子標記，主要表達在巨噬細胞的胞膜，而TGF-β1作為一種生長因子，主要表達在腫瘤細胞的胞質(zhì)，同時胃癌組織中TGF-β1、CD163的表達都較癌旁正常組織高，統(tǒng)計學分析顯示CD163和TG

4、F-β1的表達呈正相關(guān)。
　　2、胃癌腫瘤上清刺激的巨噬細胞內(nèi)miR-155的表達較非腫瘤上清刺激巨噬細胞內(nèi)miR-155的表達降低，TGF-β1刺激的巨噬細胞中miR-155表達亦顯著降低;使用TGF-β1受體阻斷劑刺激后，胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細胞內(nèi)miR-155的表達顯著升高。
　　3、巨噬細胞轉(zhuǎn)染miR-155后，ELISA檢測其分泌的IL-10的水平較轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的巨噬細胞組低，而細胞上清中分泌的IL-12的水平較轉(zhuǎn)染空