斑馬魚早期胚胎-幼魚急相期反應基因表達模式研究及血清淀粉樣蛋白A(SAA)功能分析.pdf

1、急相期反應在感染疾病的動物體內被發(fā)現(xiàn),是生物體先天性免疫應答的重要組成部分,是機體受到病源微生物的感染、創(chuàng)傷、腫瘤增生和炎癥等出現(xiàn)時所產(chǎn)生的一系列的生理反應,從而快速抵御外來微生物入侵,促進創(chuàng)傷的修復,維持穩(wěn)定的內部環(huán)境,恢復機體正常生理功能。目前很多文獻已經(jīng)報道在多種動物從魚類到哺乳動物體內都發(fā)現(xiàn)急相期反應的存在。在急相期反應通常伴隨血清中急相期反應蛋白(APPs)濃度的升高、身體發(fā)熱、血管滲透壓升高以及新陳代謝和身體病理性的變化。急

2、相期反應蛋白一般是由肝臟合成并分泌到血清中成為血漿蛋白,組成急相期反應的重要部分。在哺乳動物體內急相期反應通常是由Toll樣受體介導刺激誘導前炎癥因子(IL-1b和TNF-a)的產(chǎn)生,從而最終引起急相期反應。根據(jù)急相期反應蛋白的濃度變化可分為正急相期反應蛋白和負急相期反應蛋白。在人類體內正急相期反應蛋白有CRP、SAA、HP、C3、Bf等,白蛋白和鐵傳遞蛋白是負急相期反應蛋白。在多種魚類體內已經(jīng)證實有和人類同源的急相期反應蛋白。近年來已

3、經(jīng)有報道證明 CRP、SAA、HP、LECT2、HAMP也是成年斑馬魚體內的急相期反應蛋白。在斑馬魚或其它魚類的早期發(fā)育的胚胎體內是否也可以啟動急相期反應提供免疫保護功能的研究相對還較少。
　　在本論文中我們研究了經(jīng)LPS刺激處理的斑馬魚早期胚胎體內的急相期反應基因(CRP, SAA, LECT2, HAMP和 HP)和急相期反應的誘導基因(IL-1b和TNF-a)的表達情況來判斷早期胚胎體內是否能夠啟動急相期反應。實時熒光定量P

4、CR的結果顯示在LPS處理的斑馬魚早期胚胎中檢測的這七個基因在mRNA水平上的表達量都有顯著升高。胚胎原位雜交的結果顯示急相期反應基因和急相期反應誘導基因在正常發(fā)育的早期胚胎體內都有母源性范表達情況,隨著胚胎發(fā)育這些基因又都表現(xiàn)出組織特異性表達模式。LPS對胚胎的刺激可以誘導 SAA在胚胎的卵黃囊和腸道的特異性表達;誘導HAMP在卵黃囊的表達;誘導LECT2在卵黃囊的表達量升高;誘導IL-1b在胚胎的卵黃囊和尾部靜脈的一些血細胞中表達。

5、這些結果說明斑馬魚胚胎可以通過啟動急相期反應類提供免疫保護功能。血清淀粉樣蛋白A(SAA)是斑馬魚急相期反應的重要蛋白,在細菌感染的斑馬魚體內表達量明顯上升。本文中我們利用體外原核表達系統(tǒng)表達了 SAA,在體外研究其功能,發(fā)現(xiàn)體外表達的重組SAA不能直接抑制細菌的繁殖但可以和革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌大腸桿菌和鰻弧菌結合,也可以和LPS和LTA結合,此外通過實驗還表明重組蛋白SAA還可以促進鯉魚的巨噬細胞對大腸桿菌和金黃色