日本血吸蟲性別差異表達分子Th細胞表位的預測及鑒定.pdf

1、血吸蟲病是一種分布廣泛、危害嚴重的人畜共患病.血吸蟲為吸蟲中罕見的雌雄異體,性別的分化對血吸蟲的發(fā)育及致病起著至關重要的作用.雌雄蟲合抱是血吸蟲雌蟲發(fā)育成熟和產卵的關鍵,成熟雌蟲所產生大量蟲卵而引起肝臟病變是造成宿主主要病理損害和疾病再傳播的前提. 本研究基于Th細胞介導的免疫效應機制可能在抗感染和抗生殖疫苗中發(fā)揮著主要作用這一事實,從日本血吸蟲轉錄本組序列中篩選出性別差異表達分子,預測可能的Th細胞表位;同時對我們前期預測的分

2、泌型分子的Th細胞表位進行免疫學鑒定,為進一步實驗研究奠定基礎. 本研究應用基于計算統(tǒng)計法的數字差異展示技術從日本血吸蟲轉錄本組序列中篩選性別差異表達分子,結合國家人類基因組南方研究中心提供的相關序列信息,對選出的序列進行注釋分析:應用基于人工神經網絡、隱馬爾科夫模型、及權重矩陣分析等蛋白質二級結構預測算法軟件,預測上述序列的信號肽及跨膜結構.應用基于結合基序、矩陣法和人工神經網絡等方法的多個服務器,預測上述序列中與人、鼠的MH

3、C Ⅱ類分子結合的肽;應用基于分子動力學算法的受體配體嵌合空間結合模擬服務器,預測肽與MHC Ⅱ分子的結合情況,得到候選的Th細胞表位.用人工合成多肽法(偶聯到多聚賴氨酸骨架上)合成課題組前期預測出的日本血吸蟲分泌型分子的5個候選Th細胞表位,MTT法和氚標記法測定候選表位體外刺激免疫小鼠脾淋巴細胞增殖的情況. 結果共篩選到20個日本血吸蟲性別差異表達分子全長序列,即9個雄蟲高表達分子,11個雌蟲高表達分子;序列的二級結構預測發(fā)

4、現其中7個為分泌型整合蛋白質(2個雄蟲高表達,5個雌蟲高表達),13個為非分泌型蛋白質;表位預測得到了與人和鼠MHC Ⅱ類分子結合的21個Th細胞表位,結構對接模擬預測優(yōu)化確定了6個混雜型候選Th細胞表位,其中來源于雌蟲、雄蟲高表達分子的各有3個表位,即CSPYFVICTTKQYTR (AY814326;雌蟲;分泌型假想蛋白質分子)、YLCFVFGIIQAIYIF(AY8 13676;雄蟲;分泌型sj25四次跨膜超家族TE736分子)、

5、SETLIQVwAVNKSVP (AY815950; 雌蟲; 具泛素巰基酯酶活性) 、EGSSVLVORTHKSTS(AY810358;雌蟲;具鈣蛋白激酶活性)、FGLKRRDLIKDTM(AY812918;雄蟲;具天冬酰氨肽鏈內切酶活性) 以及 AEPIRMILVAAGVEF(AY816103;雄蟲;相似谷胱甘肽-S-轉移酶). 對前期預測的表位實驗鑒定結果顯示: 5個候選表位中有2個(VVQSIGYKFHRHGYE (AY2