骨髓基質(zhì)細(xì)胞-白血病細(xì)胞共培養(yǎng)與白血病細(xì)胞耐藥的研究.pdf

1、目的:構(gòu)建骨髓基質(zhì)細(xì)胞-白血病細(xì)胞共培養(yǎng)模型，探討某些白血病微環(huán)境成分對(duì)白血病細(xì)胞化療及分子靶向治療敏感性的影響，為探尋白血病耐藥機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:以體外常規(guī)方法單純培養(yǎng)的費(fèi)城染色體(Ph)陽(yáng)性的人急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Sup-B15及與大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)OP-9共培養(yǎng)的Sup-B15作為觀察對(duì)象。
　　 單純培養(yǎng)及共培養(yǎng)的Sup-B15細(xì)胞均設(shè)：
　　 ①實(shí)驗(yàn)細(xì)胞組：以阿糖胞苷(Ar

2、a-c)、甲磺酸伊馬替尼（STI571，格列衛(wèi)）作為干預(yù)對(duì)象；
　　 ②對(duì)照細(xì)胞組：不加藥物。
　　 1.CCK-8法觀察不同濃度阿糖胞苷、甲磺酸伊馬替尼對(duì)共培養(yǎng)前后兩組Sup-B15細(xì)胞的體外增殖活力的影響，并計(jì)算增殖抑制率。
　　 2．阿糖胞苷、甲磺酸伊馬替尼干預(yù)24h后光鏡下觀察兩組Sup-B15細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。
　　 3.AnnexinV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)加藥24h后兩組

3、Sup-B15細(xì)胞的凋亡率。
　　 4．應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)（PV法）染色技術(shù)檢測(cè)兩組Sup-B15細(xì)胞Ki-67蛋白的表達(dá)情況。
　　 5．實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)SYBR GreenⅠ法檢測(cè)兩組細(xì)胞中血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(VE-Cadherin)mRNA的表達(dá)量變化。
　　 結(jié)果:
　　 1．隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，阿糖胞苷、甲磺酸伊馬替尼對(duì)單純培養(yǎng)的Sup-B15細(xì)胞的抑制作用也逐漸增強(qiáng)，

4、細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率逐漸升高，不同藥物濃度組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；共培養(yǎng)Sup-B15細(xì)胞組，即使增加藥物濃度和作用時(shí)間，細(xì)胞的增殖抑制率亦無(wú)明顯變化趨勢(shì)，各濃度組之間比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，均P＜0.05。
　　 2．藥物干預(yù)24h后光鏡下觀察：?jiǎn)渭兣囵B(yǎng)的Sup-B15細(xì)胞，在10.0μmol/L格列衛(wèi)作用下，原有細(xì)胞正常形態(tài)消失，可見(jiàn)較多細(xì)胞破碎殘片；而共培養(yǎng)Sup-B15

5、細(xì)胞組，在藥物作用24h后，大部分仍保持原有形態(tài)：圓形、完整、破碎細(xì)胞少見(jiàn)。
　　 3．細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示：?jiǎn)渭兣囵B(yǎng)組Sup-B15細(xì)胞凋亡率與陰性對(duì)照組比較，P＜0.05；而共培養(yǎng)組Sup-B15細(xì)胞的凋亡率明顯降低，與單純培養(yǎng)組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 4．免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：?jiǎn)渭兣囵B(yǎng)組Sup-B15細(xì)胞Ki-67蛋白表達(dá)量較高，與陰性對(duì)照組比較P＜0.05；共培養(yǎng)Sup-B15細(xì)胞組K

6、i-67蛋白表達(dá)量明顯降低，與陰性對(duì)照組相比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5．熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：?jiǎn)渭兣囵B(yǎng)的Sup-B15細(xì)胞呈VE-Cadherin基因低表達(dá)，共培養(yǎng)組Sup-B15細(xì)胞VE-Cadherin基因表達(dá)量明顯上調(diào)，與單純培養(yǎng)組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1．阿糖胞苷、甲磺酸伊馬替尼抑制體外單純培養(yǎng)的人急性B淋巴細(xì)胞白血病Sup-B15細(xì)胞株的增