富血小板血漿凝膠的制備及其對骨髓間充質干細胞增殖的影響.pdf

1、富血小板血漿含有高濃度多種生長因子，能促進種子細胞的增殖、移動、分化以及膠原蛋白合成、刺激血管化的作用。但由于富血小板血漿所包含的生長因子眾多，互相之間的作用機制難以盡述，加之富血小板血漿的制作方法不同，各種方法所得富血小板血漿中血小板含量、激活率不同，所含生長因子濃度不同。因此，國內(nèi)外學者對富血小板血漿的作用看法不盡一致。 目的：抽取比格犬骨髓間充質干細胞并分離純化后，采用3種不同方法制備富血小板血漿，觀察血小板濃度及活化率，

2、以選擇合適的制作方法。PRP加入激活劑制成凝膠，分析其生物相容性，觀察不同濃度富血小板血漿凝膠對犬骨髓間充質干細胞增殖的影響。 方法：首先抽取比格犬骨髓，采用密度梯度離心法取密度為1.079±0.002g/ml的Percoll液分離骨髓間充質干細胞，經(jīng)貼壁生長法培養(yǎng)、擴增并純化細胞后流式細胞儀鑒定干細胞表型，MTT法測定3、5、10代細胞生長曲線，成軟骨及成骨誘導檢測其多向分化能力；按照Landesberg法，Aghaloo法及

3、改良兩步離心法3種不同方法制備PRP，測定血小板濃度、回收率及CD62P表達率。再將PRP與激活劑反應形成凝膠，人工計數(shù)細胞黏附率，MTT法測定細胞毒性；將不同濃度PRP凝膠作用于BMSCs，MTT法觀察細胞各個時間點吸光度，分析PRP對BMSCs的增殖效應及最佳的濃度。 結果：犬骨髓間充質干細胞經(jīng)密度梯度離心法聯(lián)合貼壁生長法分離、純化、擴增，細胞生長迅速，增殖明顯，經(jīng)流式細胞儀檢測傳5代細胞有96％表達CD44，95％表達CD

4、29，而只有5％表達CD34，并可多向分化，具有骨髓間充質干細胞的基本特征。比較3種PRP制作方法，改良兩步離心法血小板回收率較高而CD62P表達率相對較低。故以改良兩步離心法相對較好。PRP可在早期顯著促進骨髓間充質干細胞增殖，其增殖強度與PRP濃度相關，低濃度組(5％、6.25％、7.5％)普遍取得較佳的增值效應，其最大增殖度出現(xiàn)在6.25％組；而8.75％、10％后期(10d～14d)細胞增殖均減緩而進入平臺期。 結論：1