RNA干擾抑制CD44的表達對肺腺癌A549細胞增殖能力的影響.pdf

1、肺癌的發(fā)病率和死亡率近年來都有明顯的增高趨勢，最重要的原因就是早期診斷困難和腫瘤的早期轉移及術后復發(fā)。隨著分子生物學的進展，研究者們發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤預后相關的因素，如CKs蛋白、p53抑癌基因等，這些生物學標志物對肺癌患者的預后的預測都具有重要意義。而具有介導細胞粘附作用的細胞表面粘附分子在腫瘤的早期診斷、轉移潛能和預后估計等方面所體現(xiàn)出的重要價值已被眾多學者所關注。CD44是一種分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，它是一種與惡性腫瘤轉移

2、和侵襲相關的重要黏附分子[1]。研究證明CD44在浸潤和轉移的多種腫瘤組織中均呈陽性表達，因此，CD44被認為是惡性腫瘤細胞表面標志物之一[2]。
　　 腫瘤干細胞學說認為腫瘤組織中存在極小部分具有干細胞性質的細胞群體，它們具有自我更新能力和不定分化潛能。目前，研究者們正在不斷地尋找它們存在的依據(jù)，并對其生物學特性進行研究，以便可以從眾多的腫瘤細胞中將它們分離出來。在我們的前期研究中已經發(fā)現(xiàn)，肺腺癌A549細胞株中存在小部分具有

3、持續(xù)增殖分裂能力的細胞，其表面抗原CD44的陽性表達率明顯高于普通A549腫瘤細胞。該群CD44陽性細胞具有自我復制和分化能力，而且在裸鼠體內的成瘤能力明顯強于其他細胞亞群[3]。據(jù)此我們初步認為CD44可能是肺腺癌干細胞的表面標記物之一。為了驗證上述論點，我們以肺腺癌A549細胞為研究對象，通過RNAi技術，抑制其CD44表達，并對其生物學特性進行觀察，以期更加深入了解CD44在肺腺癌增殖能力中所起的作用。
　　 第一章肺腺癌

4、中CD44的表達情況及其與臨床分期、腫瘤細胞分化程度及淋巴結轉移的關系
　　 目的：探討CD44在肺腺癌中的表達及其與臨床分期、腫瘤細胞分化程度及淋巴結轉移的關系。
　　 方法：采用免疫組織化學方法檢測77例肺腺癌中CD44蛋白的表達情況，并結合臨床分期、細胞分化程度及淋巴結轉移進行分析。
　　 結果：免疫組化結果顯示：77例肺腺癌中，CD44陽性表達率是50.6％。通過對各個分類中CD44的表達情況進行分析，我

5、們發(fā)現(xiàn)：(1)CD44表達與臨床分期有一定的正相關，但統(tǒng)計學上差異無顯著性，我們考慮主要和樣本量不足有關；(2)CD44表達與腫瘤細胞的分化程度有顯著負相關性(P＜0.05)；(3)CD44在淋巴結轉移組中的表達率為77.1％，明顯高于無淋巴結轉移組的28.6％，統(tǒng)計學上有顯著性正相關(P＜0.01)。
　　 第二章肺腺癌A549細胞株CD44流式分選及增殖能力檢測
　　 目的：研究肺癌A549細胞中CD44表達與增殖能

6、力的關系
　　 方法：使用流式細胞儀分選肺腺癌A549細胞株，根據(jù)CD44的表達分為CD44+和CD44-兩組。MTS法和細胞計數(shù)法檢測各組細胞的增殖能力。
　　 結果：CD44陽性含量是38.8％。使用MTS法測定兩組細胞的生長曲線，可以發(fā)現(xiàn)各組細胞均有不斷增殖趨勢，但CD44陽性細胞的增殖速度較陰性細胞快。細胞計數(shù)圖顯示CD44陰性表達組的增殖能力較陽性表達組及未分選組明顯減弱。第三章探索干擾抑制CD44的表達對肺腺

7、癌A549細胞增殖能力的影響
　　 目的：驗證CD44與肺腺癌A549細胞增殖能力的關系方法：運用RNAi技術抑制A549細胞CD44的表達，通過MTS法和細胞計數(shù)法檢測干擾前、干擾后以及對照組的細胞增殖能力。
　　 結果：MTS顯示：轉染后的腫瘤細胞活力較轉染前有顯著下降。細胞計數(shù)顯示：轉染siRNA-CD44細胞的倍增速度與其他組比較，在第四天開始出現(xiàn)明顯的減慢；轉染后組的MTS和細胞計數(shù)曲線均向轉染前陰性組靠攏。<