血管內(nèi)皮生長因子轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞復合支架治療犬月骨缺血壞死.pdf

1、目的：觀察血管內(nèi)皮生長因子基因(VEGF165)轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)支架復合物治療液氮冷凍犬月骨缺血壞死模型的效果，為臨床治療月骨無菌性缺血壞死(Kienb(o)ck 病)提供新方法。
　　 方法：抽取成年健康雜種犬的髂骨骨髓，體外分離純化并貼壁培養(yǎng)BMSCs。
　　 支架復合物構(gòu)建：a.接種于可吸收聚羥基乙酸(PGA)支架制備BMSCs-PGA 復合物；
　　 b.用脂質(zhì)體法將攜帶熒光蛋白VEGF1

2、65基因的穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)入傳代培養(yǎng)后的骨髓基質(zhì)干細胞中，接種于PGA 支架制備AdVEGF165-BMSCs-PGA 復合物；壞死月骨的造模：靜脈麻醉成功后，顯露犬月骨背側(cè)，用剝離破壞月骨周圍血供加液氮冷凍的方法造模，術(shù)后3W MRI 篩選出有早期月骨壞死征象模型犬12只；改良模型并行復合支架移植：再次麻醉并暴露月骨背側(cè)，開5×10mm 骨皮質(zhì)窗，盡可能多的剔除月骨內(nèi)壞死組織，騷刮后的空腔再次用液氮充填10min，然后移至室溫10min，凍

3、融過程重復3 次，最后將PGA，BMSCs-PGA和AdVEGF165-BMSCs-PGA分別移植進壞死月骨的空腔中；分組：將月骨壞死改良模型12只犬按隨機數(shù)字表達法分為3組，轉(zhuǎn)染細胞移植組(移植AdVEGF165-BMSCs-PGA 復合物)，細胞移植組(移植BMSCs-PGA 復合物)和PGA 移植對照組，每組各4只；觀測：移植術(shù)后第4、8、12W分別對各組犬月骨行X線、CT、MRI 影像學及相關(guān)組織學和免疫組化檢測，觀察各組移植物

4、對壞死月骨改良模型的再血管化和骨修復能力。
　　 結(jié)果：對全部12只壞死月骨改良模型的觀測結(jié)果均進行分析。移植術(shù)后12W轉(zhuǎn)染細胞移植組影像學和組織學評價壞死月骨修復情況均高于細胞移植組、對照組，差異具有顯著性意義(P＜0.01)。免疫組化染色結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染細胞移植組可見壞死月骨血管化更明顯，對缺血壞死月骨修復能力優(yōu)于后兩者。
　　 結(jié)論：同種異體移植的血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞PGA 復合物(AdVEGF16