平滑肌樣細胞分化過程中Myocardin的表達及作用研究.pdf

1、高脂血癥是動脈粥樣硬化（AS）最重要的危險因子，在高脂等因素所致的AS發(fā)生發(fā)展中，平滑肌細胞增生并合成細胞外基質(zhì)是其重要環(huán)節(jié)。長期以來很多學者認為AS斑塊中平滑肌細胞源于血管中膜平滑肌細胞的遷移和增生，然而近年研究證實抑制其遷移和增生并不能有效阻止AS的發(fā)生和發(fā)展。大量研究說明骨髓及外周血祖細胞可能參與了AS的形成。在平滑肌祖細胞向平滑肌細胞分化的過程中myocardin是迄今所發(fā)現(xiàn)的最關(guān)鍵的促血管平滑肌細胞分化因子，myocardin

2、基因?qū)肽承┓瞧交〖毎螅せ盍艘幌盗衅交》只瘶酥净蚝偷鞍椎谋磉_并使其向平滑肌細胞分化，用RNA干擾技術(shù)阻抑myocardin基因表達可降低平滑肌細胞特異激酶相關(guān)蛋白telokin啟動子的活性，myocardin基因缺陷可導致胚胎鼠血管平滑肌細胞的分化完全被阻斷，進一步說明myocardin為祖細胞向平滑肌細胞分化所必需。我們提出假設(shè)：骨髓及外周血平滑肌組細胞是AS斑塊中平滑肌細胞的重要來源之一；在平滑肌祖細胞向平滑肌細胞分化，參

3、與AS斑塊形成過程中，myocardin起關(guān)鍵作用；myocardin基因表達可能影響AS形成，一旦抑制myocardin基因表達有可能控制AS斑塊發(fā)生進展。 目的：在用血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)聯(lián)合20％胎牛血清（FBS）誘導骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）向平滑肌細胞(SMC)分化過程中，通過對促血管平滑肌細胞分化因子myocardin和平滑肌分化標志物基因α-actin，SM-22等表達的研究，探討myocar

4、din在促血管平滑肌細胞分化中的重要作用。同時比較PDGF-BB，20％FBS聯(lián)合誘導與20％FBS單獨誘導的作用有無區(qū)別。 方法：采用骨髓干細胞培養(yǎng)基和貼壁法從小鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細胞，然后細胞分為兩組誘導其向平滑肌細胞分化：（1）20％FBS單獨誘導；（2）PDGF-BB(50ng/ml)聯(lián)合20％FBS誘導BMSC。分別于誘導前,及誘導4天，8天，12天后用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法(reverse transcript

5、ion-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測細胞myocardin,α-actin，SM-22的mRNA表達情況。以小鼠胸主動脈SMC作為陽性對照。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示兩誘導組細胞的myocardin，α-actin，SM-22的mRNA的表達情況為在誘導4天時比誘導前增強，誘導8天時比4天增強(P<0.05),而誘導8天及12天時表達基本趨于穩(wěn)定，與SMC相比無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.