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文檔簡介
1、目的:探討球型脂聯(lián)素(gad)對高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)NO及DDAH-ADMA系統(tǒng)的影響
方法:體外培養(yǎng)HUVECs至對數(shù)生長期,gad(2.5ug/ml)處理高糖誘導不同時間(24h、48h)HUVECs,不同濃度 gad(0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml)處理高糖誘導48h HUVECs,硝酸還原酶法測定培養(yǎng)液上清NO濃度;再將HUVECs隨機分為正常對照組(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖組
2、(33.0mmol/L)、gad組(33.0mmol/L葡萄糖+2.5ug/ml gad),L-NAME組(33.0mmol/L葡萄糖+2.5μg/ml gad+100μmol/L L-NAME),硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液上清NO濃度,化學比色法測定NOS活力,高效液相色譜法分析ADMA水平,根據(jù)ADMA的量反映DDAH活性,western blot檢測eNOS、P-eNOS的表達。
結(jié)果:①gad處理高糖誘導HUVECs不同時
3、間(24h、48h),高糖作用24h,引起NO分泌增加,而作用48h,NO分泌顯著減少(P<0.05),與同一時間高糖組相比,gad組NO顯著升高(P<0.05);②不同濃度gad(0.1、0.5、2.5、12.5μg/ml)處理高糖誘導48h HUVECs,NO水平先隨gad濃度的增加而顯著增加,但gad2.5μg/mL與12.5μg/mL相比,NO水平差異無顯著性(P<0.05);③2.5μg/ml gad處理高糖誘導48h HUV
4、ECs,高糖組較對照組相比,NO含量顯著降低,NOS活性及p-eNOS表達均減少(P<0.05),而總eNOS表達無顯著差異(P>0.05);④高糖組與正常對照組相比ADMA含量升高,DDAH活性降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),2.5μg/mL gad處理后,與高糖組相比,NO含量顯著升高,NOS活性顯著增強,P-eNOS表達顯著增加,總eNOS蛋白表達仍無統(tǒng)計學差異(P>0.05);ADMA水平gad組與高糖組相比降低,DD
5、AH活性增加,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),加入 L-NAME100μmol/L,與gad組相比,NO含量顯著減少,NOS活性減低,P-eNOS表達減少,差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05),總eNOS表達仍無差異(P>0.05),ADMA水平升高,DDAH活性降低,差異均具有顯著性(P<0.05)。
結(jié)論:⑴高糖環(huán)境下gad可逆轉(zhuǎn)HUVECs合成NO的減少,并升高NOS活性,增加eNOS-Ser1177磷酸化,但對eNOS
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