c-Ski在動脈粥樣硬化中的作用、機制與調(diào)控研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是動脈壁粥樣斑塊形成、引起血管彈性及功能降低甚至堵塞,從而導致血管所營養(yǎng)的組織失去營養(yǎng)及缺血缺氧壞死的一種慢性進行性疾病。其中,血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的異常增殖及遷入內(nèi)膜導致新生內(nèi)膜形成是導致動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關鍵因素之一。
　　c-Ski,是禽類白血病轉化病毒v-Ski的細胞內(nèi)同源物,其最早作為原癌基因而被發(fā)現(xiàn)。隨后,在

2、發(fā)育及腫瘤研究中證實c-Ski可作為TGF-β/smad途徑的輔阻遏子,通過抑制Smad磷酸化及活性復合物形成而阻斷TGF-β/smad對靶基因的調(diào)控。此前,諸多研究表明,TGF-β激活smad3信號通路是導致動脈粥樣硬化中血管平滑肌細胞異常增殖的主要原因之一。由此,我們推測c-Ski將有可能通過影響TGF-β下游信號通路而對血管平滑肌細胞的異常增殖發(fā)揮重要調(diào)控作用。為此,我們借助體外大鼠血管平滑肌細胞培養(yǎng)、大鼠動脈粥樣硬化模型等對c-

3、Ski的作用、機制以及其自身的基因表達調(diào)控等進行了探索。具體研究內(nèi)容為:
　　1、用TGF-β刺激大鼠血管平滑肌細胞A10細胞模擬在體血管平滑肌細胞異常增殖情況,過表達及干擾A10細胞中c-Ski表達,觀察其對細胞增殖的影響;并借助細胞信號通路檢測明確其分子機制。
　　2、構建大鼠球囊損傷致動脈粥樣硬化模型,借助c-Ski體內(nèi)基因遞送觀察其對在體致傷動脈血管平滑肌細胞增殖、新生內(nèi)膜形成的影響,進一步從在體證實c-Ski在動脈

4、粥樣硬化中的作用與機理。
　　3、基于本課題組前期對過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorsγ,PPARγ)對c-Ski表達調(diào)控的初步研究,進而利用生物信息學分析、熒光素酶報告基因檢測、凝膠遷移滯后實驗、染色質共沉淀實驗、細胞增殖實驗等進一步闡明PPARγ對c-Ski的調(diào)控機制。
　　4、動態(tài)檢測大鼠高脂飲食及球囊損傷兩種動脈粥樣硬化模型中動脈壁內(nèi)源性c

5、-Ski的mRNA及蛋白表達變化,探索內(nèi)源性c-Ski在動脈粥樣硬化進程中的基因表達調(diào)控機理及對動脈粥樣硬化進程的影響。
　　通過上述研究,我們證實:
　　1、c-Ski能顯著抑制血管平滑肌細胞異常增殖及血管內(nèi)膜增生,具有抗動脈粥樣硬化作用。其分子機制在于c-Ski抑制TGF-β/Smad3信號通路而促進p38信號通路,從而上調(diào)了p21和p27。
　　2、c-Ski是核受體PPARγ的又一靶基因,PPARγ可通過與其5

6、'-UTR的-865~-853處DR1序列“AGGTAAGGGGACA”結合,從轉錄水平上調(diào)c-Ski而發(fā)揮對血管平滑肌細胞異常增殖的抑制作用。
　　3、在大鼠高脂飲食及球囊損傷模型中,動脈組織內(nèi)源性c-Ski蛋白水平進行性降低,而mRNA水平卻無顯著變化,表明其受到轉錄后水平調(diào)控。生物信息學分析及初步實驗表明miR-17-5p可能與c-Ski3'-UTR結合而從轉錄后水平抑制c-Ski表達、并促進血管平滑肌細胞增殖。