高氟對人牙胚成釉細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察高氟區(qū)及非高氟區(qū)引產(chǎn)胎兒牙胚成釉細(xì)胞的形態(tài)變化及不同發(fā)育時(shí)期成釉細(xì)胞增殖、分化及調(diào)亡的發(fā)生，研究成釉細(xì)胞形態(tài)及相關(guān)調(diào)控因子的改變在氟牙癥形成過程中的作用，探討氟牙癥的發(fā)病機(jī)制。 方法：分別取高氟區(qū)（織金縣）及非高氟區(qū)（遵義縣）合法引產(chǎn)胎兒各10例設(shè)為實(shí)驗(yàn)組及對照組。胎齡均為14—28周。取胎兒下領(lǐng)骨，經(jīng)乙二胺四乙酸（Ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）脫鈣四周，做唇舌向連續(xù)病理

2、組織切片及透射電鏡（transmission electron microscope，TEM）切片，采用HE染色技術(shù)及TEM觀察胎兒牙胚成釉細(xì)胞不同時(shí)期形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)的變化；通過原位雜交技術(shù)以及免疫組織化學(xué)檢測技術(shù)，觀察胎兒牙胚釉質(zhì)形成過程中成釉細(xì)胞中調(diào)控基因增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、細(xì)胞周期及細(xì)胞周期素D1（CyclinD1）、bcl-2、bax、信號分子smad

3、4及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1），骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）的表達(dá)。采用圖像分析軟件對免疫組化染色及原位組織雜交染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果：HE染色結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組胎兒分泌期成釉細(xì)胞排列極不規(guī)則，高度變矮，失去高柱狀形態(tài)，一些細(xì)胞發(fā)生扭曲細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒和不規(guī)則的空泡。透射電鏡顯示實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改

4、變，細(xì)胞器減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，線粒體腫脹、變形，胞漿內(nèi)有空泡產(chǎn)生，一些細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡跡象；免疫組化及原位雜交結(jié)果可見在實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞中參與調(diào)控細(xì)胞增殖的因子PCNA、CyclinD1表達(dá)較對照組減弱，與對照組比較存在顯著性差異；bcl—2、bax、smad4、TGF—β1、BMP—2的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組成釉細(xì)胞中表達(dá)較對照組減弱，實(shí)驗(yàn)組和對照組比較有顯著性差異。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)組釉質(zhì)形成過程中成釉細(xì)胞發(fā)生一系列形態(tài)學(xué)變化，細(xì)胞因子PC