農(nóng)桿菌介導(dǎo)β-1，3-葡聚糖酶基因轉(zhuǎn)入嘎拉蘋果的研究.pdf

1、本研究以蘋果(Malus domestica Borkh)主栽品種嘎拉(Gala)組培苗為試材，系統(tǒng)研究了影響葉片離體再生及葉盤法遺傳轉(zhuǎn)化效率的若干因素，優(yōu)化了蘋果離體葉片再生不定芽系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)；以農(nóng)桿菌EHA105為介導(dǎo)將目的基因——β-1，3-葡聚糖酶抗病基因?qū)胩O果品種，成功獲得了轉(zhuǎn)化植株，為今后蘋果遺傳轉(zhuǎn)化及抗病性研究提供了依據(jù)。試驗結(jié)果表明： 1．蘋果不同外植體再生不定芽能力不同，以葉片的再生效果優(yōu)于白化莖段。

2、 2．繼代苗苗齡對嘎拉葉片不定芽再生效率無明顯影響，但考慮到取材的難易，以繼代培養(yǎng)20～30d為宜。 3．蘋果離體葉片再生過程中，前期暗培養(yǎng)可以顯著提高葉片再生頻率。暗培養(yǎng)時間以14～21d為宜，隨暗培養(yǎng)時間延長再生頻率雖沒有降低趨勢，但是再生芽黃化現(xiàn)象嚴重，不利生長。 4．接種方式對嘎拉蘋果的葉片再生效率影響不顯著，但對再生芽數(shù)的影響顯著，以近軸面朝上接種再生芽數(shù)多。 5．在根癌農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)的遺

3、傳轉(zhuǎn)化體系中，以葉片為轉(zhuǎn)化受體，適宜的卡那霉素(Kan)選擇壓為10mg/L，抑菌抗生素為頭孢霉素(Cef)300mg/L。 6．研究了影響葉盤法遺傳轉(zhuǎn)化的因素，優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化途徑：外植體在分化培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)1～2d；農(nóng)桿菌懸浮至對數(shù)生長期，菌液濃度為OD<,600>=0．6～0．8時侵染外植體10min；共培養(yǎng)1～2d；然后脫菌、選擇同時進行，每隔20d左右更換一次選擇培養(yǎng)基。 7．共有19個轉(zhuǎn)化株系通過了Kan抗性檢