MiR-29c在骨肉瘤中的表達及對骨肉瘤細胞系SOSP9607增殖、轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、骨肉瘤是一種少見的骨原發(fā)惡性腫瘤，早期肺轉(zhuǎn)移、臨床預(yù)后差是骨肉瘤的特點，也是影響患者生存率的重要因素。microRNA是一種具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用的小分子RNA，具有多種生理功能，參與多種惡性腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，miR-29家族中的miR-29c在多種惡性腫瘤中表達下調(diào)，并驗證其對多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和增殖起到抑制作用，前期實驗證實miR-29c在骨肉瘤組織和細胞系中異常表達，提示其可能參與了骨肉瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。
　　目的：

2、
　　驗證miR-29c在骨肉瘤組織中的異常表達和不同侵襲能力骨肉瘤細胞系中的差異表達；探究miR-29c對骨肉瘤細胞系增殖、侵襲和遷移能力的影響，為骨肉瘤的分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用實時定量PCR檢測68例骨肉瘤、正常組織標本miR-29c的表達；用此法檢測SOSP-9607骨肉瘤細胞系的兩組侵襲性不同的細胞亞系F5M2和F4中miR-29c的表達。
　　2.采用Lipofectami

3、ne2000脂質(zhì)體法分別將miR-29c mimics和inhibitor瞬時轉(zhuǎn)染入SOSP-9607的兩個細胞亞系，構(gòu)建miR-29c高表達、低表達骨肉瘤細胞模型。
　　3.對所構(gòu)建的細胞模型進行腫瘤細胞功能實驗，包括Transwell侵襲和遷移實驗、MTT法檢測腫瘤細胞增殖曲線；流式細胞儀法檢測腫瘤細胞周期和凋亡比例。
　　結(jié)果：
　　1.骨肉瘤組織miR-29c表達明顯低于瘤旁正常組織；高侵襲性F5M2骨肉瘤細胞

4、系miR-29c表達明顯低于低侵襲性F4骨肉瘤細胞系。
　　2.用Lipofectamine2000脂質(zhì)體分別將miR-29c mimics和inhibitor成功轉(zhuǎn)入F5M2骨肉瘤細胞系和F4骨肉瘤細胞系。RT-PCR結(jié)果驗證F5M2/29c mimics細胞中miR-29c表達增加；F4/29c inhibitor細胞通過RT-PCR間接驗證其靶基因的表達，證明F4骨肉瘤細胞miR-29c下調(diào)成功。
　　3.Transw

5、ell細胞侵襲和遷移實驗顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細胞F5M2侵襲和遷移能力較對照組均明顯下降；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細胞F4侵襲和遷移能力較對照組明顯提升。MTT細胞增殖實驗顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細胞F5M2增殖能力較對照組減弱，細胞增殖曲線下移；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細胞F4增殖能力較對照組增強，細胞增殖曲線上移。
　　4.流式細胞儀細胞周期和細胞凋亡實驗顯示，miR-29c上調(diào)的骨肉瘤細胞F5M2與對

6、照組相比，各周期腫瘤細胞比例無明顯差異，凋亡細胞比例也無明顯差異；miR-29c下調(diào)的骨肉瘤細胞F4與對照組相比，各周期腫瘤細胞比例亦無明顯差異，凋亡細胞比例無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1.miR-29c骨肉瘤組織中表達含量下調(diào)，且高侵襲性骨肉瘤細胞miR-29c表達含量低于低侵襲性骨肉瘤細胞系，提示miR-29c與腫瘤侵襲能力呈負相關(guān)，miR-29c可能參與了骨肉瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控。
　　2.通過構(gòu)建m