大鼠腦損傷后海馬糖皮質(zhì)激素受體變化對(duì)認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的：采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顱腦損傷裝置制作外傷性腦損傷（traumaticbraininjury,TBI）的動(dòng)物模型，研究外傷性腦損傷后大鼠海馬區(qū)糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoidreceptor,GR）表達(dá)變化及其對(duì)認(rèn)知功能的影響，以期待為臨床腦保護(hù)治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：健康Stragu-Dawley（SD）大鼠，清潔級(jí)，雄性，體重200～250g。將120只大鼠完全隨機(jī)化分組：對(duì)照組（24只），損傷組（96只）

2、，將損傷組分別劃分為傷后4d，5d，6d，7d，共4個(gè)時(shí)相每組24只。運(yùn)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顱腦損傷裝置進(jìn)行腦外傷動(dòng)物模型的制作；并按規(guī)定時(shí)間處死大鼠,取海馬組織，分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)、蛋白免疫印跡（westernblotting）、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscription-PCR,RT-PCR)三種方法檢測(cè)海馬區(qū)GR在各個(gè)時(shí)相的表達(dá)變化情況。另取16只大鼠完全隨機(jī)化分組：對(duì)照組和損傷組，每組各8只。根據(jù)Morris水迷宮測(cè)

3、定方法，本實(shí)驗(yàn)于損傷后4d始行第一次Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，4/d，連續(xù)4d，隨機(jī)從四個(gè)象限(N、S、E、W)任一個(gè)象限將大鼠面向池壁放入水中，如果大鼠在120s內(nèi)未找到平臺(tái)，由實(shí)驗(yàn)者將其引至平臺(tái)，并使大鼠在平臺(tái)上停留15s，以便大鼠對(duì)平臺(tái)的記憶，逃避潛伏期記為120s。每次訓(xùn)練完成后，迅速用干毛巾將大鼠擦干，并放置于加熱器旁，以防大鼠體溫過(guò)低。記錄大鼠尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間即逃避潛伏期，記錄小鼠找到平臺(tái)的時(shí)間（逃避潛伏期）。在最后一日

4、去除平臺(tái)再進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，將大鼠從離原平臺(tái)最遠(yuǎn)的象限面向池壁放入水中，記錄大鼠在30s內(nèi)在原有平臺(tái)象限內(nèi)穿越平臺(tái)的次數(shù)。通過(guò)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的變化并結(jié)合傷后各組在相同時(shí)間點(diǎn)海馬區(qū)GR表達(dá)變化，去探討GR對(duì)大鼠海馬創(chuàng)傷后認(rèn)知功能的影響及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)中所得數(shù)據(jù)均以x±S表示，應(yīng)用SPSS14.0軟件進(jìn)行各組之間ANOVA法進(jìn)行方差分析和配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：大鼠腦損傷后各時(shí)

5、相海馬CA1區(qū)存在廣泛的神經(jīng)元變性壞死，并且隨時(shí)間的推移病理現(xiàn)象呈現(xiàn)緩解趨勢(shì)。而海馬區(qū)GR表達(dá)也呈現(xiàn)相應(yīng)的變化趨勢(shì)即傷后海馬區(qū)GR的表達(dá)呈下調(diào)趨勢(shì)。在傷后6d表達(dá)量最低，隨后開始恢復(fù)，但各個(gè)時(shí)相損傷組的GR表達(dá)均低于對(duì)照組。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:大鼠腦創(chuàng)傷后存在顯著的空間認(rèn)知功能障礙，在傷后6d檢測(cè)尋找平臺(tái)潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組的潛伏期。
　　結(jié)論：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顱腦損傷裝置制作出理想的大鼠彌漫性軸索損傷模型。大鼠腦損傷后，海馬區(qū)神經(jīng)元存在