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文檔簡介
1、本試驗主要以蝴蝶蘭、文心蘭作為材料,建立了蝴蝶蘭、文心蘭的高頻再生體系,并在此基礎(chǔ)上進行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GUS基因的轉(zhuǎn)化,利用共培養(yǎng)后組織化學染色法分析探討了影響轉(zhuǎn)化效率的各種因素,初步優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化體系。主要結(jié)果如下: 1.蝴蝶蘭幼嫩花梗原球莖狀體誘導(dǎo)率較高,培養(yǎng)基MS+6-BA 5.0mg/L+NAA 0.5 mg/L誘導(dǎo)率最高,達100%;原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+TD
2、Z 0.2 mg/L,增殖系數(shù)達2.3;原球莖塊在培養(yǎng)瓶內(nèi)有群體優(yōu)勢效應(yīng),切塊3.0 mm時增殖系數(shù)最大;添加6-BA和NAA的1/2 MS有利于生根,平均根數(shù)達到3.2條;室內(nèi)煉苗3 d+室外煉苗3 d有利于移栽,移栽成活率達90.0%。 2.以文心蘭花梗為材料,在NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+TDZ 0.3mg/L的培養(yǎng)基上,愈傷組織誘導(dǎo)率最高,可達78%,誘導(dǎo)率受[NAA]/[6-BA]的濃度比和光
3、照強度的影響;在6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L的激素組合下,從愈傷組織分化出幼苗的形成率和商品化率可達到最佳效果;中、低無機鹽濃度且全量的基本培養(yǎng)基較利于幼苗分化;當分化形成的幼苗株高為1-2 cm時,可進一步壯苗生根,生根苗在適宜條件下移栽,成活率可達99%以上。 3.以蝴蝶蘭原球莖為外植體進行農(nóng)桿菌介導(dǎo),優(yōu)化的轉(zhuǎn)化條件為預(yù)培養(yǎng)時間3d,菌液侵染濃度OD<,600>=0.3,菌液侵染時間10 min,p
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