Rab27B對肝癌細胞增殖和遷移能力的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer)是人類最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)生和致死率極高。據(jù)世界衛(wèi)生組織2008年統(tǒng)計分析報告表明:目前全球每年的新增發(fā)病人數(shù)已超過74.8萬,病死人數(shù)高達69.6萬,位居全球惡性腫瘤發(fā)病率第5位,病死原因第3位。其中百分之八十五的病例集中在發(fā)展中國家,更有50％的新發(fā)和死亡肝癌病例發(fā)生在中國,同時肝癌在西方國家的發(fā)病率也在不斷增長。
　　肝癌中約70%-85%屬于肝細胞癌(Hepatoc

2、ellular carcinoma,HCC),其特點是誘因復雜,起病隱匿,發(fā)展迅速,而且極易復發(fā)和轉移,這也是影響其術后治療效果和預后的最大障礙。
　　腫瘤細胞與基質細胞間存有高度密切的信息交流。這也是其異型相互作用浸潤性生長,逐步發(fā)展,最終造成轉移的先決條件。腫瘤細胞交流方式有細胞間直接接觸和間接釋放單分子,或(包裹分泌物)膜狀小泡三種方式。Rab蛋白是小分子GTP結合蛋白家族（small GTP-binding protein

3、s)中最大的亞家族,在所有真核生物中均表達,Rab家族中迄今為止己發(fā)現(xiàn)了超過60個成員,負責著真核生物內膜系統(tǒng)的運輸功能。其中Rab27亞族包括兩個成員:Rab27A和Rab27B。Rab27B主要通過與其效應分子的相互作用來發(fā)揮功能,主要是參與大多數(shù)分泌性細胞的胞吐作用及多泡體的運輸過程。已有研究表明:Rab27B在乳腺癌,胃癌等多種上皮來源腫瘤細胞中有表達,并與乳腺癌轉移和侵襲性相關。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)Rab27B分子在高轉移肝癌細

4、胞株表達上調,猜想Rab27B的表達可能和肝癌的侵襲和遷移存在一定相關性,然而Rab27B與肝細胞癌增殖、遷移運動相關性及其參與的分子機制尚未見系統(tǒng)的研究報道。
　　為了進一步確定Rab27B與HCC發(fā)生、發(fā)展及轉移的相關性,我們首先采用Western blot方法檢測在6株不同轉移能力的人肝癌細胞系中檢測Rab27B蛋白表達水平,驗證其與肝癌細胞轉移能力相關性,并檢測了Rab27B分子的細胞定位,以探討定位和功能的關系。在此基礎

5、上,選取較高轉移能力的HCC細胞株MHCC97H作為細胞模型,采用RNAi技術構建針對Rab27B基因的特異性shRNA慢病毒載體,篩選到穩(wěn)定敲低Rab27B的MHCC97H細胞株,命名為shRab27B-1＃和shRab27B-2＃,其Rab27B的表達水平與陰性對照MHCC97H-NC細胞相比顯著下降。
　　選取較低轉移能力的HCC細胞株MHCC97L作為細胞模型,通過基因過表達技術,構建重組慢病毒表達載體,并篩選得到穩(wěn)定過表

6、達 Rab27A,Rab27B和Rab27B-GER基因的MHCC97L細胞株和陰性對照細胞株,其Rab27B蛋白表達水平與陰性對照組MHCC97L-GFP細胞相比顯著增高。
　　HCC的轉移過程中涉及到細胞的增殖、黏附、遷移和侵襲等方面的特性,因此本研究也從這幾個方面進行。首先,Rab27B在MHCC97H細胞中表達定位于胞質中,通過體外實驗比較Rab27B穩(wěn)定敲低和過表達細胞株和陰性對照細胞株的增殖、黏附、遷移和侵襲能力,結果