EGb761對過氧化氫預處理PC12細胞的保護作用.pdf

1、老年性癡呆又稱阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，是一種好發(fā)于中老年人的神經退行性變疾病，以記憶丟失和認知功能障礙為典型臨床表現。其病因目前尚不清楚，大多認為是一種多病因疾病，與遺傳、增齡、免疫功能異常、感染等有關。大量的研究表明，氧化應激在AD等神經退行性疾病的發(fā)病中起著重要作用。可溶性的Aβ、Aβ原纖維、神經元纖維纏結、線粒體異常和老化等均可引起氧化應激的發(fā)生。EGb761的主要成分黃酮是最強的天然抗氧化劑

2、之一，能清除自由基，減少脂質過氧化物和脂褐素的生成與沉積，提高超氧化歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)的活性，保護細胞膜，調節(jié)器官組織功能，有效延緩衰老。許多研究表明氧化預處理是減輕氧化應激對細胞損傷的有效途徑。體內內源性氣體信號分子硫化氫(hydrogen sulphide，H2S)可通過抑制細胞凋亡從而對神經細胞起到保護作用。 本研究通過建立PC12細胞的損傷模型，探討幾種處理因素EGb761、H2O

3、2預處理、H2S對H2O2引起的PC12細胞損傷的保護作用以及各處理因素間是否存在配伍關系，為EGb761在AD治療中的可能應用提供實驗依據。 目的： 探討EGb761對H2S處理、過氧化氫預處理后再給予過氧化氫損傷的PC12細胞的作用。分別討論EGb761、硫化氫和過氧化氫三種處理因素對抗細胞凋亡的作用和機制。 方法： 1.實驗分組 根據實驗需要分組如下： (1)空白對照組； (

4、2)H2O2處理； (3) EGb761+ H2O2處理； (4) H2S+ H2O2處理； (5) EGb761+ H2S+H2O2處理； (6) H2O2預處理+H2O2處理； (7) EGb761+ H2O2預處理+H2O2處理； (8) H2S+H2O2預處理+H2O2處理； (9) EGb761+ H2S+H2O2預處理+H2O2處理； 2.分組干擾因素

5、用低濃度的H2O2(100μM)作用于PC12細胞90min，接著給予24h的恢復期，應用EGb761標準品溶液，應用硫化氫鈉(sodium hydrosulfide，NaHS)作為H2S的供體作用于PC12細胞，再給予實驗所需要濃度的H2O2(300μM)作用于PC12細胞12h。 3.細胞的凋亡情況 碘化丙啶(PI)染色流式細胞技術(FCM)檢測細胞凋亡率，Hoechst染色檢測細胞凋亡的形態(tài)學變化，甲氮甲唑藍(MT

6、T)法檢測細胞存活率，羅丹明123(rhodamine123)染色FCM檢測細胞細胞線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential，MMP)的含量。 4.統(tǒng)計學分析 所得數據結果用均數±標準差(-x±s)表示，利用SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。計量資料多組均數比較采用方差分析。 結果： (1) H2O2預處理可以對抗高濃度H2O2誘導的PC12

7、細胞損傷：用較小濃度的H2O2預處理之后再進行損傷處理的組別對照未進行預處理的組別，預處理增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (2) EGb761可以對抗高濃度H2O2誘導的PC12細胞損傷：使用100μmol/LEGb761與300μM H2O2共同作用的組別對照未進行藥物處理的組別，藥物組增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (3) H2S可以對抗高濃度H2O2誘導的PC

8、12細胞損傷：使用100μmol/L NaHS與300μM H2O2共同作用的組別對照未進行藥物處理的組別，藥物組增加了細胞生存率、降低凋亡率、增加線粒體膜電位(MMP)； (4) EGb761和NaHS聯合作用可以對抗高濃度H2O2誘導的PC12細胞損傷； (5)預處理組聯合藥物組和單純使用藥物或者預處理的組別均可以觀察到細胞生存率增高、凋亡率降低、線粒體膜電位(MMP)增加。 結論： 1.H2O2會引

9、起氧化應激，從而導致PC12細胞凋亡； 2.以較小濃度的H2O2進行預處理，可以起到一定的保護作用； 3.EGb761可以一定程度上抑制H2O2引起的氧化應激對于細胞的損傷； 4.EGb761和H2O2預處理能協(xié)同的抑制H2O2引起的氧化應激對于細胞的損傷； 5.NaHS能明顯對抗H2O2引起的PC12細胞的凋亡，此保護作用可能與NaHS保護PC12細胞的MMP有關； 6.NaHS和H2O2預處理